【摘 要】
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嗜盐放线菌由于其独特的生理特性和代谢机制,成为结构新颖、活性迥异的次生代谢产物的重要来源。当前,病原微生物抗药性不断增强,现有的抗生素及药物的研发中很难筛选到结构新颖、活性强的先导化合物,而盐湖作为微生物来源的极端环境之一,已成为研究的热点。本实验采集新疆达坂城盐湖淤泥,对盐湖放线菌进行分离与鉴定,并结合拮抗活性实验筛选出具有生物活性的菌株,分离活性菌株的次级代谢产物,测定其结构并检测其抑菌和抗肿
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“新疆盐湖放线菌来源的星孢菌素类化合物及其PKCθ抑制活性研究”的部分研究成果（项目编号:U1903101）课题主持人:马忠俊教授宋素琴副研究员（新疆农业大学）；
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嗜盐放线菌由于其独特的生理特性和代谢机制,成为结构新颖、活性迥异的次生代谢产物的重要来源。当前,病原微生物抗药性不断增强,现有的抗生素及药物的研发中很难筛选到结构新颖、活性强的先导化合物,而盐湖作为微生物来源的极端环境之一,已成为研究的热点。本实验采集新疆达坂城盐湖淤泥,对盐湖放线菌进行分离与鉴定,并结合拮抗活性实验筛选出具有生物活性的菌株,分离活性菌株的次级代谢产物,测定其结构并检测其抑菌和抗肿瘤活性。主要研究结果如下:（1）从新疆乌鲁木齐达坂城区达坂城盐湖湖水边采集15-20 cm深的淤泥样品,并在室温下自然晾干7-10天,采用平板稀释涂布法选择4种特殊培养基分离出嗜盐细菌18株,经过形态学结合分子生物学鉴定这18株嗜盐细菌,分属于14个属,分别为Bacillus（2株）、Pseudoxanthomonas（1株）、Rhodococcus（1株）、Micromonospora（1株）、Streptomyces（2株）、Brevibacterium（1株）、Tsukamurella（2株）、Planococcus（1株）、Nocardiodes（1株）、Metabacillus（1株）、Paenibacillus（1株）、Microbacterium（1株）、Micrococcus（1株）、Nocardiopsis（2株）。其中放线菌12株,稀有放线菌10株。其中M-7培养基分离出的种类最多。（2）对部分放线菌采用平板对峙法测定其抗菌活性,同时采用SRB法测定抗肿瘤活性,结合薄层色谱TLC和分析型高效液相初步筛选后,选择编号Streptomyces sp.DBC5作为次级代谢产物挖掘的目标菌株。（3）经形态学鉴定、生理生化特性和分子鉴定菌株DBC5为链霉菌Streptomyces longispororuber。运用硅胶柱色谱、高效液相色谱HPLC等分离纯化方法以及高分辨质谱、IR红外光谱、NMR核磁共振等结构鉴定技术手段从该菌株的液体发酵产物中分离鉴定出4个化合物,分别为阿拉伯霉素arabomycin（1）,对羟基苯甲酸（2）,乌达霉素urdamycinone B（3）,strepolyketide D（4）,这4个化合物均为从该菌中首次分离,其中化合物4为新结构化合物。（4）对以上单体化合物进行了活性评价,包括抗菌活性和抗肿瘤活性。抗菌活性结果表明,化合物1、3具有较好的抗铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）活性,其MIC值分别为12.5μg/m L和3.13μg/m L（阳性药庆大霉素:MIC值为3.13μg/m L）。化合物1、3、4对大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、表皮葡萄球菌Staphylococcus epidermidis和白色念珠菌Candida albicans的拮抗活性较弱,其MIC均大于50μg/m L。细胞毒性实验结果表明,化合物1、3对结肠癌细胞HCT-116增殖具有一定的活性,IC50分别为20.0μM和23.5μM;化合物1对肺癌细胞A549增殖具有一定的活性,IC50为29.6μM。
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