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背景近年来乳腺癌发病率不断上升,且呈现年轻化趋势,成为严重威胁女性生命健康的杀手。三阴性乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)难以从内分泌治疗及抗Her-2靶向治疗中获益,化疗仍是其主要的治疗方法,然而长期的临床实践证实常规化疗疗效并不十分理想。充足的血液供应奠定了肿瘤细胞快速增殖、侵袭、转移的基础。抗血管生成治疗在许多癌症中发挥良好的疗效,但在TNBC的临床实践中并未达到理想效果。研究发现血管生成拟态(Vasculogenic mimicry,VM)与抗血管生成治疗疗效欠佳有关,所以针对TNBC中VM的深入研究,是解决目前TNBC抗肿瘤血管生成治疗效果欠佳的可靠途径。目的通过检测VM、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在TNBC及乳腺良性病变组织中的表达情况,探讨其与TNBC患者临床病理参数的关系及三者之间的相关性,进一步探讨完善OPN调控三阴性乳腺癌血管生成拟态的形成机制,为探索TNBC的抗血管生成的靶向治疗提供更充足的理论依据。方法采用回顾性研究方法,收集整理临床资料完整的病理初诊TNBC组织标本120例及乳腺良性病变的组织标本30例运用血小板-内皮细胞粘附分子1(Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)和过碘酸雪夫液(periodic acid-schiff stain,PAS)双重染色方法,采用半定量积分法观察TNBC及乳腺良性病变组织切片中VM 的表达情况;应用免疫组织化学染色(Immunohistochemical,IHC)方法检测两组标本中OPN、MMP-2的表达情况,统计分析三者在乳腺良恶性组织标本中的表达差异性,及三者表达与TNBC患者临床病理参数的关系,同时应用Spearman秩相关分析VM、OPN及MMP-2在TNBC中表达的相关性。结果1 TNBC及乳腺良性病变组织中VM、OPN及MMP-2的表达情况1.1 TNBC及乳腺良性病变组织中VM的表达情况120例TNBC石蜡组织切片进行CD31与PAS双重染色,显微镜下观察具有VM样形态的TNBC标本有32例(26.67%)。30例乳腺良性病变组织切片中镜下未观察到VM的阳性表达。相比于乳腺良性病变组织,VM在TNBC患者中高表达,差异有统计学意义(χ2=10.169,P=0.001)。1.2 TNBC及乳腺良性病变组织标本中OPN、MMP-2的表达情况在实验组TNBC中,OPNMMP-2的阳性表达情况分别为30例、86例,阳性率分别为25%、71.67%;对照组良性乳腺病变组织中OPNMMP-2的阳性表达情况分别为1例、5例,阳性率分别为3.3%、16.7%。统计分析表明OPN和MMP-2在TNBC组织中表达率明显高于乳腺良性病变组织,差异有统计学意义(χ2=6.872,P=0.009;χ2=30.425,P=0.000)。2 TNBC临床病理参数与VM、OPN、MMP-2的关系VM、OPN及MMP-2在TNBC中阳性率与患者年龄、绝经状态、及家族史均无相关性(P>0.05),而是与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期和Ki67有相关性(P<0.05)。肿瘤较大组、临床分期较晚组、淋巴结转移较多组、Ki67表达较高组的VM、OPN和MMP-2的阳性表达率分别高于肿瘤较小组、临床分期较早者、淋巴结转移较少或无转移组、Ki67表达较低组的VM、OPN和MMP-2的阳性率。3 TNBC中VM、OPN、MMP-2表达的相关性3.1 TNBC中VM组、无VM组中的OPN表达情况OPN阳性表达以胞质为主。TNBC组织中,OPN主要在肿瘤细胞中表达,并且间质中偶可见阳性染色。TNBC中OPN阳性表达率为25%(30/120),VM 阳性组中OPN阳性表达率为68.75%(22/32),VM阴性组中OPN阳性表达率为9.09%(8/88)。显微镜下采用半定量积分法判读染色结果,然后统计分析两组中OPN表达水平的差异性,结果显示:两组间OPN表达有显著性差异(P<0.05),并且VM的阳性表达率与OPN的表达有正相关性(rs=0.609,P=0.000)。3.2 TNBC中VM组、无VM组中的MMP-2表达情况MMP-2阳性表达以胞质为主。TNBC组织MMP-2主要肿瘤细胞中表达,偶尔间质细胞也可见阳性染色。TNBC中MMP-2阳性表达率为71.67%(86/120)。VM阳性组中MMP-2阳性表达率为93.75%(30/32),VM阳性组中MMP-2阳性表达率为63.64%(56/88)。显微镜下采用半定量积分法判读染色结果,统计学分析两组间MMP-2表达有显著性差异(P<0.05),并且VM的阳性表达率与MMP-2的表达有正相关性(rs=0.296,P=0.001)。3.3 TNBC中OPN组、无OPN组中的MMP-2表达情况TNBC中MMP-2阳性表达率为71.67%(86/120)。OPN组阳性表达率为86.67%(26/30),无OPN组阳性表达率为75%(60/80)。显微镜下采用半定量积分法判读染色结果,结果显示两组间MMP-2表达有显著性差异(P<0.05),并且OPN的阳性表达率与MMP-2的表达有正相关性rs=0.192,P=0.035)。结论1.相比于乳腺良性病变组织,TNBC中VM、OPN及MMP-2高表达。2.TNBC中VM、OPN及MMP-2的表达程度与肿瘤的恶性程度有关,且VM、OPN及MMP-2在TNBC中的表达有正相关性。