苯巴比妥（Phenobarbital,PB）是一种具有镇静和催眠作用的精神药品,可用于治疗人失眠的症状。由于它具有催眠作用的这个特殊功能,一些不法商家会将其用作助睡眠保健品中,但PB存在神经、骨髓、致畸、致癌等多方面毒性作用,长期食用在人体内蓄积,其残留对人类健康是一种威胁。我国《食品安全法》规定不得在食品生产中使用食品添加剂以外的化学物质和可能危害人体健康的物质,PB也被同时列入2012年3月6日食药监发布的《保健食品中可能非法添加的物质名单》中,因此加强对保健食品中苯巴比妥的检测监控十分重要。免疫检测技术具有灵敏、快速、高通量等优点,可作为仪器检测的补充方法,同时满足实际样品的安全快速筛查需求,近年来已成为食品安全研究领域的研究热点。本文以苯巴比妥为对象,设计合成了具有特征结构的半抗原、人工抗原并制备了PB多克隆抗体,建立了苯巴比妥的免疫分析方法ELISA（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）和CLEIA（Indirect competitive CLEIA,ic CLEIA）,主要研究内容和结果如下:（1）PB半抗原与人工抗原的合成与鉴定。从其分子结构出发,保留其特征结构的苯环,在嘧啶环的3号碳原子位置延伸羧基结构,采用质谱鉴定后,以活泼酯法偶联载体蛋白BSA、KLH和OVA,获得免疫原PB-1-BSA、PB-1-KLH及包被原PB-1-OVA,经紫外分光光度仪鉴定,采用免疫原PB-1-BSA、PB-1-KLH免疫新西兰大白兔,获得了特异性抗血清PB-1,抗血清PB-1的效价为1:32,000,对1μg/m L的PB药物抑制率为70%。（2）PB-ic ELISA方法的建立。经优化后的条件为:包被原浓度为0.1μg/m L,抗体稀释倍数为32,000倍,最佳的反应缓冲体系为0.02 M、p H=6.4、Tween-20含量为0.20%的PBST缓冲溶液,一抗反应30 min,二抗反应30 min。得到优化后的方法检出限为(IC10)为0.02μg/m L,IC50为0.55μg/m L,线性检测范围(IC20～IC80)为0.08～3.637μg/m L。该方法与苯巴比妥钠交叉反应率为96%,与其余5种苯巴比妥结构类似物（巴比妥、戊巴比妥、硫巴比妥、奥卡西平、卡马西平）交叉反应率均<0.1%,批间、批内变异系数<15%,安神口服液、片剂、胶囊样品添加回收率在71.1%～96.3%之间,表明该方法适用于实际样品的检测。（3）PB-ic CLEIA方法的建立。经优化后的条件为:包被抗原浓度为0.0625μg/m L,抗体稀释倍数为16,000倍,最佳的反应缓冲体系为0.02 M p H=6.4、Tween-20含量为0.20%的PBST缓冲溶液,一抗反应时间为40 min,二抗反应时间为40 min。得到优化后的方法检出限为(IC10)为0.01μg/m L,IC50为0.24μg/m L,线性检测范围(IC20～IC80)为0.03～1.83μg/m L,该方法除与苯巴比妥钠的交叉反应率为104%,与其余5种苯巴比妥结构类似物（巴比妥、戊巴比妥、硫巴比妥、奥卡西平、卡马西平）交叉反应率均<0.1%,批间、批内变异系数<15%,安神口服液、片剂、胶囊样品添加回收率在80.3%～99.3%之间,表明该方法适用于实际样品的检测。