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目的:通过考察黑豆汁制何首乌及大黄素联用大豆苷元对肝肠转运蛋白及代谢酶表达的影响,并运用Ussing Chamber技术研究大豆苷元经肠粘膜的渗透情况,探讨黑豆汁制何首乌减毒作用机制。方法:1.何首乌及黑豆汁制何首乌对大鼠肝肠转运蛋白及代谢酶表达的影响考察大鼠随机分为空白（CON）组,生何首乌（PM）组,清蒸何首乌（PPM）组,生何首乌+黑豆汁（PM+BB）组,清蒸何首乌+黑豆汁（PPM+BB）组,豆制何首乌（PMBB）组,连续给药14d后取材;采用RT-qPCR方法检测肝脏中P-gp、Mrp2、Mrp3、Mrp4、Oatp1、Oatp2、Bsep、Ntcp、CYP3A1、CYP3A2及UGT1A1 mRNA表达变化情况,以Western blot法检测蛋白表达变化情况;采用RT-qPCR方法检测空肠中Mrp2、Mrp3、Mrp4 mRNA表达变化情况,以Western blot法测定蛋白表达变化情况。2.大黄素对大鼠肝肠转运蛋白及代谢酶表达的影响考察大鼠随机分为空白组及大黄素低浓度（20mg/kg/d）组、中浓度（40mg/kg/d）组、高浓度（80mg/kg/d）组,连续给药30d后取材,检测不同浓度大黄素组血清生化指标的变化,并采用RT-qPCR方法测定不同浓度大黄素组肝脏中P-gp、Mrp2、Mrp3、Mrp4、Oatp1、Oatp2、Bsep、Ntcp及UGT1A1mRNA表达变化情况,以Western blot法测定蛋白表达变化情况;采用RT-qPCR法测定各肠段转运蛋白P-gp、Mrp2、Mrp3、Mrp4 mRNA表达变化情况,以Western blot法测定蛋白表达变化情况。3.大黄素与大豆苷元联合用药对大鼠肝肠转运蛋白或代谢酶表达的影响考察大黄素（80mg/kg/d）与不同浓度大豆苷元（4、8、16mg/kg/d）联用,将给药组随机分为:大黄素（EM）组,大黄素+大豆苷元低浓度（DM+DL）组,大黄素+大豆苷元中浓度（EM+MD）组,大黄素+大豆苷元高浓度（EM+HD）组,给药30d后取材,检测大鼠血清生化指标,采用RT-qPCR方法测定肝脏中P-gp、Mrp3、Ntcp、UGT1A1 mRNA表达变化情况,以Western blot法测定蛋白表达变化情况;采用RT-qPCR法测定十二指肠、空肠段转运蛋白Mrp2 mRNA表达变化情况,以Western blot法测定蛋白表达变化情况。4.P-gp、Mrp2、Mrp3抑制剂对大豆苷元经大鼠肠道外排转运的影响考察运用课题组前期已建立的实验模型,分别考察大豆苷元是否为P-gp、Mrp2、Mrp3的底物。在大鼠肠粘膜侧分别加P-gp抑制剂维拉帕米,Mrp2抑制剂MK-571,Mrp3抑制剂苯溴马隆,用LC-MS/MS检测不同浓度大豆苷元在各个肠段吸收和分泌方向表观渗透系数与外排转运率的变化,与不含抑制剂的对照组（CON）相比较,推测大豆苷元是否为P-gp、Mrp2、Mrp3的底物。结果:1.何首乌及黑豆汁制何首乌对大鼠肝肠转运蛋白及代谢酶表达的影响（1）与空白组比较,各给药组Mrp2、Mrp4、Oatp1、Oatp2、Bsep、Ntcp、CYP3A1、CYP3A2 mRNA表达无显著性差异,生何首乌组大鼠肝脏转运蛋白p-gp、Mrp3 mRNA表达及蛋白水平均显著上调（P<0.01）,UGT1A1 mRNA表达及蛋白水平均显著下调（P<0.01）。与生何首乌组比较,生何首乌+黑豆汁组,清蒸何首乌+黑豆汁组,豆制何首乌组p-gp mRNA及蛋白水平均显著下调（P<0.01）;生何首乌+黑豆汁组,清蒸何首乌+黑豆汁组,豆制何首乌组Mrp3 mRNA及蛋白水平均显著下调（P<0.01）;生何首乌+黑豆汁组,清蒸何首乌+黑豆汁组,豆制何首乌组UGT1A1 mRNA表达均显著上调（P<0.01）,且豆制何首乌UGT1A1蛋白表达显著上调（P<0.01）。（2）与空白组比较,各给药组空肠段Mrp4 mRNA表达无显著变化,生何首乌组大鼠空肠段转运蛋白Mrp2 mRNA表达及蛋白水平显著下调（P<0.01）,Mrp3 mRNA表达及蛋白水平均显著上调（P<0.01）。与生何首乌组比较,豆制何首乌组Mrp2 mRNA及蛋白表达均显著上调（P<0.05）;清蒸何首乌+黑豆汁组、豆制何首乌组Mrp3 mRNA表达均显著下调（P<0.05）,清蒸何首乌组、清蒸何首乌+黑豆汁组、豆制何首乌组蛋白水平显著上调（P<0.05）。2.大黄素对大鼠肝肠转运蛋白或代谢酶表达的影响（1）与空白组比较,不同给药组ALT、AST、TP、ALB、LAP、ADA、GLB水平均无显著变化,大黄素中浓度组及高浓度组血清肝功能TBIL、DBIL、TBA、ALP均显著上升（P<0.05）。（2）与空白组比较,各给药组Mrp2、Mrp4、Oatp1、Oatp2、Bsep mRNA表达无显著性差异,大黄素中浓度组及高浓度组肝脏p-gp、Mrp3 mRNA表达及蛋白水平均显著上调（P<0.01）,Ntcp、UGT1A1 mRNA表达及蛋白水平均显著下调（P<0.01）,大黄素低浓度组p-gp、Mrp3、Ntcp、UGT1A1表达无显著变化。（3）与空白组比较,给药组各肠段P-gp、Mrp3、Mrp4 mRNA表达均无显著变化;大黄素高浓度组十二指肠与空肠段Mrp2 mRNA及蛋白表达均显著下调,大黄素低浓度组、中浓度组无显著变化。3.大黄素与大豆苷元联合用药对大鼠肝肠转运蛋白或代谢酶表达的影响考察（1）与空白组比较,给药组ALT、AST、TP、ALB、LAP、ADA、GLB水平均无显著变化,大黄素组大鼠血清肝功能ALP、TBIL、DBIL、TBA均显著上升（P<0.05）,与不同浓度大豆苷元联用后显著降低。与大黄素组比较,大黄素+低浓度大豆苷元组、大黄素+中浓度大豆苷元组、大黄素+高浓度大豆苷元组TBIL与ALP水平均显著下降（P<0.05）;大黄素+中浓度大豆苷元组、大黄素+高浓度大豆苷元组DBIL水平均显著下降（P<0.05）;大黄素+高浓度大豆苷元组TBA水平均显著下降（P<0.05）。（2）与空白组相比,大黄素组、大黄素+低浓度大豆苷元组、大黄素+中浓度大豆苷元组、大黄素+高浓度大豆苷元组P-gp与Ntcp mRNA表达无显著性差异,大黄素组大鼠肝脏转运蛋白Mrp3 mRNA及蛋白水平均显著升高（P<0.01）。与大黄素组比较,大黄素+中浓度大豆苷元组、大黄素+高浓度大豆苷元组Mrp3 mRNA及蛋白水平均显著升高（P<0.05）,大黄素+低浓度大豆苷元组无显著变化。与空白组比较,大黄素组大鼠肝脏转运蛋白UGT1A1 mRNA及蛋白水平均显著降低（P<0.01）,与不同浓度大豆苷元联用后显著升高。与大黄素组比较,大黄素+中浓度大豆苷元组、大黄素+高浓度大豆苷元组UGT1A1 mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.05）,而大黄素+低浓度大豆苷元组无明显变化。（3）与空白组比较,给药组大鼠十二肠转运蛋白Mrp2 mRNA水平均无显著差异,大黄素组大鼠空肠Mrp2 mRNA及蛋白水平均显著升高（P<0.05）与大黄素组比较,大黄素+中浓度大豆苷元组、大黄素+高浓度大豆苷元组Mrp2 mRNA及蛋白表达均显著升降低（P<0.05）,但大黄素+低浓度大豆苷元组无显著变化。4.P-gp、Mrp2、Mrp3抑制剂对大豆苷元经大鼠肠道外排转运的影响（1）与对照组相比较,加入P-gp抑制剂后,不同浓度的大豆苷元经空肠段外排转运率增加,低浓度与中浓度大豆苷元经回肠及结肠段外排转运率均增加,而高浓度大豆苷元经回肠及结肠段外排转运率均有下降的趋势,但无统计学意义。（2）与对照组相比较,加入Mrp2抑制剂mk571后,不同浓度的大豆苷元经十二指肠段外排转运率均显著下降（P<0.05）。与对照组相比较,加入Mrp2抑制剂mk571后,不同浓度的大豆苷元经空肠段外排转运率均显著下降（P<0.05）。与对照组相比较,加入Mrp2抑制剂mk571后,不同浓度的大豆苷元经回肠段外排转运率均显著下降（P<0.01）。（3）与对照组相比较,加入Mrp3抑制剂苯溴马隆后,不同浓度不同浓度的大豆苷元经空肠、回肠、结肠段外排转运率均无显著差异。结论:黑豆汁制何首乌减毒作用机制可能与抑制肝脏中P-gp、Mrp3及空肠中Mrp3表达的上调,肝脏中UGT1A1及肠道中Mrp2的表达下调有关;大黄素与大豆苷元联用后胆汁淤积型肝损伤降低,其机制可能与抑制肝脏中Mrp3及UGT1A1的表达上调,空肠段Mrp2的表达下调有关;大豆苷元可能是Mrp2的底物;黑豆汁制何首乌减毒作用机制可能与大豆苷元对肝脏中Mrp3与UGT1A1、肠道中Mrp2表达的影响有关。