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目的:观察人骨关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast-like synoviocytes-osteoarthritis,HFLS-OA)体外培养时生长增殖的情况及细胞特征,对两种原代培养方法(组织块培养法和酶消化法)进行比较,并进行细胞鉴定;观察不同浓度的白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对HFLS-OA增殖的影响;观察并比较不同浓度梯度的TGP对Wnt信号通路的影响。方法:取新鲜骨关节炎患者滑膜组织,分别使用组织块培养法、酶消化法进行原代HFLS-OA培养;分离培养FLS原代细胞至P3代,运用流式细胞仪进行鉴定后备用;不同浓度(312.5ug/ml;625ug/ml;1250ug/ml;2500ug/ml;5000ug/ml)的TGP干预HFLS-OA 24h后,用CCK8法测定TGP对HFLS-OA生长的抑制作用;不同浓度(625ug/ml;1250ug/ml;2500ug/ml;5000ug/ml)的TGP与HFLS-OA共同孵育24h后,运用Western-blot法分析不同浓度干预后的HFLS-OA中β-catenin、DKK-1、sFRP-1蛋白表达水平的影响。结果:与酶消化法相比,组织块培养法培养的FLS生长情况良好,数量更多、形态更为一致;HFLS-OA P0代细胞形态不一,参杂各种细胞,随着培养时间的延长及传代的影响,至P3代可获得纯化的FLS;流式细胞仪检测示经培养获得的细胞95%以上呈Vimentin阳性、CD68阴性,符合FLS的特点;随着TGP浓度的增加(625ug/ml;1250ug/ml;2500ug/ml;5000ug/ml),OD值逐渐降低,有统计学意义(p=0.016,p<0.001,p<0.001,p<0.001),低浓度TGP(312.5ug/ml)组与对照组OD值无明显差异(p=0.100);随着TGP浓度的改变(625ug/ml;1250ug/ml;2500ug/ml;5000ug/ml),β-catenin表达逐渐降低(p<0.001),而DKK-1、sFRP-1蛋白的表达水平升高(p<0.05)。结论:组织块培养法可以获得足量、纯化的FLS,相比酶消化法更为可靠;TGP能抑制HFLS-OA增殖,并呈浓度依赖性;TGP在一定药物浓度范围内调节HFLS-OA中Wnt信号通路的活化水平。