干细胞融合诱导EMT的实验研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hutianyi199052
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目的:肿瘤转移过程有多种因素参与,上皮间质转化(EMT)可能是促进其转移的因素之一,细胞融合在EMT中的作用值得重视。本研究体外培养正常胃粘膜上皮细胞系(GES-1)及GES-1与脐带来源间充质干细胞(CM-MSCs)的融合细胞,探索细胞融合参与上皮细胞EMT的可能。方法:体外培养GES-1、CM-MSCs及融合细胞,观察细胞形态及生长特性。划痕实验、Transwell实验检测融合细胞迁移侵袭能力。噻唑蓝比色分析法(MTT)分析融合细胞增殖活性。免疫细胞化学染色法分析三种细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达情况。RT-PCR技术检测三种细胞EMT相关基因Slug、Twist的mRNA的转录水平。结果:融合细胞与GES-1相比,细胞核增大,胞浆减少。融合细胞增殖活性较CM-MSCs及GES-1明显增强;获得向基质胶侵袭的能力,迁移与侵袭能力增强。融合细胞间质性标记蛋白N-cadherin、Vimentin的染色强度分别为4.067±1.387和5.067±1.907,GES-1分别为2.333±1.234和2.067±0.961。融合细胞与GES-1相比N-cadherin、Vimentin的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。融合细胞Twist、Slug因子的mRNA转录水平分别为0.0122±0.0060和0.0065±0.0022,GES-1分别为0.0013±0.0007和0.0010±0.0003。融合细胞与GES-1相比Twist、Slug因子的mRNA转录水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:间充质干细胞和上皮细胞融合产生的融合细胞核增大,胞浆减少,增殖活性较亲代CM-MSCs及GES-1明显增强,迁移与侵袭能力增强。融合细胞间质性标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达,EMT相关转录因子Twist、 Slug因子的mRNA转录水平较上皮细胞上调,表明间充质干细胞和上皮细胞融合诱导子代细胞发生EMT,导致子代细胞呈现恶性倾向。干细胞融合可能是参与肿瘤发生和进展的机制之一6
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