轮状病毒（Rotavirus）属于呼肠孤病毒属，是一种双链核糖核酸病毒。目前有研究表明引起婴幼儿腹泻的单一主因是由轮状病毒感染，感染后人体自身会产生肠毒素，这种毒素会引起儿童严重腹泻，情况严重的话会脱水而殒命。VP7结构蛋白是由结构基因v p7编码的，它是轮状病毒的结构性中和抗原，能诱导产生IgA 抗体和 IgG 抗体，与人体的免疫系统有关，可作为轮状病毒 G血清型的判断跟据。虽然现在有一些轮状病毒的减毒活疫苗在接种后可以增强婴幼儿的抵抗力，但是目前没有能够治疗轮状病毒感染的特效药物，并且由于在不同地区有着轮状病毒不同的流行株或流行株组合，它们都具有其不同的免疫原性，所以针对不同型的轮状病毒开发安全有效的蛋白疫苗具有重要意义。本实验的目的是为开发轮状病毒蛋白疫苗做准备工作，为抑制我国轮状病毒的传播感染提供技术保障。　　由于病毒不能够在体外培养，所以本研究通过毕赤酵母GS115表达系统，将轮状病毒株G1、G2、G3血清型的中的v p7基因分别转化入毕赤酵母GS115中，初步筛选出转化子，之后利用甲醇诱导目的蛋白VP7蛋白的表达，之后在DNA、RNA和蛋白质水平进行检测，通过正交试验的方法，利用检测成功的转化子来优化发酵条件。设计引物，以公司优化后提供的三个质粒为模板，分别克隆出三个vp7基因目的片段，并将其分别与pMD18-T载体连接。利用Not I和EcoR I双酶切 pMD18-T-G1、pMD18-T-G2、pMD18-T-G3 ，之后分别与同样双酶切的质粒pPIC9K 连接，成功构建三个重组载体。利用电转化的方法将三个重组质粒分别转化入毕赤酵母中，通过MD培养基初步筛选，之后经PCR扩增、实时定量PCR和Western Blotting来进一步检测，只筛选出3株 Mut+阳性的G2型转化子，G1和G3型转化子并未成功筛选出来。　　最后，运用正交试验的方法对毕赤酵母诱导目的蛋白的条件进行优化。首先进行诱导时间、培养基初始pH、培养基加入甲醇的浓度、诱导温度的四个单因素试验，之后进行正交试验L9（34），所有的实验均设立3个重复组。最后的结果表明，影响目的蛋白表达量的影响因素主次为诱导温度>诱导时间>培养基甲醇浓度>培养基初始 pH，并且通过验证和统计学分析得出最佳的诱导条件：温度为28℃，培养基初始pH为4.0，培养基甲醇浓度为3%，诱导时间为72 h时目的蛋白的表达量最高，浓度为0.142mg/ml。