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目的:观察热敏灸对膝骨性关节炎（Knee osteoarthritis,KOA）兔犊鼻穴区肥大细胞、炎性致痛物质及瞬时感受器电位香草酸受体1（transient receptor potential vanilloid,TRPV1）的影响,及背根神经节P物质（substance P,SP）、蛋白激酶C（Protein Kinase C,PKC）、TRPV1的含量变化,探讨其穴位外周敏化及镇痛效应机制。方法:实验一:采用随机数字表法将36只新西兰兔随机兔分为空白组6只,假手术组6只,造模组24只。采用木瓜蛋白酶溶液注射膝关节腔法造模15d,假手术组关节腔内注射等量的0.9%Na Cl溶液。造模成功后,造模组随机分成模型组（6只）,艾灸组（18只）。艾灸组艾灸“犊鼻”穴,每日1次,每次40 min,共7 d。采用热断层扫描成像系统与温度记录仪测兔腹部、踝关节等部位温度。治疗期间,每天兔腹部、踝关节等任一部位温度升高均超过1℃的划分为热敏灸组,共10只,每天升高不足1℃的划分为非热敏灸组,共7只,在1℃上下波动的则排除,共1只。热敏灸组与非热敏灸组各随机抽取6只进行观察。空白组、假手术组、模型组不予干预措施。干预结束后,（1）观察各组兔行为学变化;（2）肉眼观察滑膜组织情况;HE染色法观察软骨、滑膜组织病理学变化及软骨Mankin’s评分;（3）甲苯胺蓝染色法观察犊鼻穴区中肥大细胞的数量;（4）免疫荧光单标法观察犊鼻穴区炎性致痛物质（5-HT、HA、SP、CGRP）的含量;（5）Real-time PCR法检测各组兔犊鼻穴区皮肤TRPV1 mRNA的含量。实验二:按随机数字表法将66只新西兰兔随机兔分为空白组6只,假手术组6只,模型组6只,艾灸组48只。造模及腧穴敏化判定方法同实验一,其中,艾灸组在治疗7天内温度波动均>1℃的有29只,温度波动均≤1℃的有9只,在1℃上下波动的有10只。热敏灸组在29只中随机抽取24只分为CPZ（TRPV1拮抗剂）组6只、CAP（TRPV1激动剂）组6只、溶媒剂组6只、热敏灸对照组（即热敏灸组）6只,非热敏灸在9只中随机抽取6只纳入观察。CPZ组、CAP组、溶媒剂组治疗前先在犊鼻穴区（0.5cm×0.5cm）处涂抹浓度为0.1%CPZ,0.5%CAP,及等量的溶媒,10分钟涂抹1次,共涂抹4次,之后继续艾灸40 min。非热敏灸组、热敏灸组同样艾灸40 min,空白组、假手术组、模型组不予干预措施。干预结束后,（1）Real-time PCR法检测各组兔背根神经节PKC mRNA的含量;（2）Western blot法检测各组兔背根神经节SP、p-TRPV1蛋白的表达。结果:实验一:1.各组兔行为学:造模后,与空白组比较,假手术组、模型组、非热敏灸组、热敏灸兔Lequesne MG评分均升高（均P<0.01）。干预后,与模型组比较,非热敏灸组、热敏灸组Lequesne MG评分下降（P<0.05,P<0.01）,但两组组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。2.各组兔干预后光镜下关节软骨组织病理学观察及评分:与空白组比较,模型组软骨病理损害严重,软骨Mankin’s评分上升（P<0.01）。与模型组比较,非热敏灸、热敏灸组软骨病理损害减轻,软骨Mankin’s评分下降（P<0.01）,其中热敏灸组优于非热敏灸（P<0.05）。3.各组兔干预后肉眼及光镜下滑膜组织病理学观察:肉眼观:模型组关节腔内有大量积液,部分呈脓性改变,滑膜增生肥厚,可见明显充血水肿。非热敏灸组关节腔内有少量积液,滑膜增厚,毛细血管充血。热敏灸组滑膜增厚,但无明显充血水肿。光镜下观:模型组滑膜组织中有中度滑膜细胞及结缔组织增生,并伴有血管增生及大量炎症细胞成团聚集。非热敏灸组可见滑膜组织轻度增生,有炎性细胞浸润。热敏灸组未见明显滑膜组织增生,血管周围有少量炎症细胞聚集。4.各组兔干预后犊鼻穴区肥大细胞计数:与空白组比较,模型组肥大细胞数增加,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,非热敏灸、热敏灸组肥大细胞数下降,差异有统计学意义（均P<0.01）;与非热敏灸组比较,热敏灸组肥大细胞数下降,差异有统计学意义（P<0.05）。5.各组兔干预后犊鼻穴区炎性致痛物质表达:与空白组比较,模型组5-HT、HA、SP、CGRP平均光密度明显增加,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,非热敏灸组、热敏灸组5-HT、HA、CGRP、SP平均光密度下降（P<0.01,P<0.05）;与非热敏灸比较,热敏灸组5-HT、HA、SP、CGRP平均光密度下降,差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）。6.各组兔干预后犊鼻穴区TRPV1 mRNA表达:与空白组比较,模型组TRPV1mRNA表达上升,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,非热敏灸组及热敏灸组TRPV1 mRNA表达下降,差异有统计学意义（均P<0.01）;与非热敏灸组比较,热敏灸组TRPV1 mRNA表达下降,差异有统计学意义（P<0.05）。实验二:1.各组兔干预后背根神经节中PKC mRNA表达:与空白组比较,模型组PKC mRNA表达上升,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,非热敏灸组、CPZ组、CAP组、溶媒剂组、热敏灸组PKC mRNA表达下降,差异有统计学意义（均P<0.01）;与非热敏灸组比较,CPZ组、热敏灸组PKC mRNA表达下降,差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;与CPZ组比较,CAP组、溶媒剂组、热敏灸组PKC mRNA表达上升,差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;与CAP组比较,溶媒剂组、热敏灸组PKC mRNA表达下降,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。2.各组兔干预后背根神经节中SP、p-TRPV1蛋白表达:与空白组比较,模型组SP、p-TRPV1蛋白表达上升,差异有统计学意义（均P<0.01）;与模型组比较,非热敏灸组、CPZ组、CAP组、溶媒剂组、热敏灸组SP、p-TRPV1蛋白表达下降,差异有统计学意义（均P<0.01）;与非热敏灸组比较,CPZ组、溶媒剂组、热敏灸组SP、p-TRPV1蛋白表达下降,差异有统计学意义（均P<0.01）;与CPZ组比较,CAP组、溶媒剂组、热敏灸组SP、p-TRPV1蛋白表达上升,差异有统计学意义（均P<0.01）;与CAP组比较,溶媒剂组、热敏灸组SP、p-TRPV1蛋白表达下降,差异有统计学意义（均P<0.01）。结论:1.肥大细胞及炎性致敏物质5-HT、HA、SP、CGRP、TRPV1可能是犊鼻穴发生热敏化的物质基础。2.TRPV1是热敏灸镇痛的关键靶点。热敏灸可通过降低SP、PKC、p-TRPV1含量,抑制SP/PKC/TRPV1通路的激活,减轻炎性局部的痛敏反应而发挥其治疗KOA的作用。