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目的:菊科旋复花属(Inula L.)植物全世界约有100种,分布于欧洲、亚洲及非洲,以地中海地区为主,我国有20余种。旋复花为菊科的多年生草本植物,是一种传统的中草药,多年来一直用于治疗胃肠炎、支气管炎及结核性腹泻等。目前报道旋复花的化学成分主要有黄酮类、倍半萜内酯类和萜类化合物,其中证明有药理活性的成分大多数为倍半萜内酯类化合物,具有抗炎、抗肝损伤、抗肿瘤和细胞毒等作用,对糖尿病也有疗效。本实验以人子宫颈癌细胞株(HeLa)、人子宫内膜癌细胞株(HEC-1)、人卵巢透明癌细胞株(SHIN-3)、人卵巢透明癌细胞株(HOC-21)和人卵巢囊腺癌细胞株(HAC-2)为材料,研究旋复花中化合物异土木香内酯、1-氧-乙酰大花旋复花内酯和大花旋复花内酯对这5种妇科肿瘤细胞的体外生长的抑制作用,并进一步探讨旋复花中单体化合物异土木香内酯抗HeLa细胞增殖的作用机制。方法:1 MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法1.1肿瘤细胞株悬液制备用RPMI1640完全培养基调整HeLa等肿瘤细胞株浓度为2×105个/mL的细胞悬液备用。1.2实验用化合物的体外抑瘤实验将HeLa肿瘤细胞株悬液接种于96孔培养板,每孔50μL,分别加入空白对照磷酸盐缓冲液、溶剂对照0.05%二甲基亚砜、阳性对照顺铂(DDP)以及1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L单体化合物各50μL,每组均设3个复孔。置于培养箱中培养48 h,于培养结束前4 h,各培养孔加入5 mg/mL四甲基偶氮唑蓝(MTT)10μL,培养4~6 h后,弃去培养上清,每孔加入反应停止液150μL,振荡10 min,使结晶充分溶解,用酶联免疫检测仪检测各孔吸光度(OD)值,测定波长λ=570 nm,参考波长λ=620 nm,并计算肿瘤细胞生存率。1.3活性化合物的广谱抗肿瘤细胞增殖活性实验选择具有活性的单体化合物,考察活性化合物对人子宫内膜癌细胞株(HEC-1)、人卵巢透明癌细胞株(SHIN-3和HOC-21)和人卵巢囊腺癌细胞株(HAC-2)的增殖的抑制作用。2流式细胞仪及AnnexinⅤ-FITC试剂盒分析细胞凋亡细胞传代进入对数生长期,实验组加入12.5μmol/L的异土木香内酯,空白对照组加入磷酸盐缓冲液,于培养48 h后收集细胞,用4℃预冷的PBS洗细胞两次,用250μL结合缓冲液重新悬浮细胞,调解其浓度为1×106/mL,取100μL的细胞悬液于5 mL流式管中,加入5μL AnnexinⅤ/FITC和10μL 20μg/mL的碘化丙锭溶液,混匀后于室温避光孵育15 min,在反应管中加400μL稀释好的结合缓冲液,及时上流式细胞仪分析。结果:1 MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法结果旋复花中化合物具有明显的抑制妇科肿瘤细胞增殖活性,异土木香内酯、1-氧-乙酰大花旋复花内酯和大花旋复花内酯对HeLa、HEC-1、SHIN-3、HOC-21、HAC-2细胞增殖有不同的抑制活性。其中异土木香内酯对HeLa、HEC-1、HOC-21、HAC-2细胞的增殖显示较强的抑制活性,异土木香内酯用1μmol/L、10μmol/L和100μmol/L处理HeLa细胞,其生存率分别为91.81%、66.67%和18.65% ,对HEC-1细胞生存率的影响分别为92.96%、68.67%和33.96%,对HOC-21细胞生存率的影响分别为83.57%、73.37%和20.72%,对HAC-2细胞生存率的影响分别为85.62%、49.75%和20.53% ,均呈现较好的剂量依赖关系,并且该化合物100μmol/L组与空白对照组相比均具有非常显著性的差异(P<0.01),半数抑制浓度(IC50)分别约为17.67μmol/L、32.74μmol/L、19.65μmol/L和11.49μmol/L。2流式细胞仪及AnnexinⅤ-FITC试剂盒分析细胞凋亡结果异土木香内酯以12.5μmol/L处理HeLa细胞,于48 h后进行Annexin-Ⅴ/PI染色,流式细胞仪检测,结果显示HeLa细胞早期凋亡率为(40.75±5.16)%,PBS组为(3.47±3.82)%,异土木香内酯12.5μmol/L浓度组与PBS组相比,具有显著性差异(P<0.05)。流式细胞检测进一步证实异土木香内酯具有明显诱导HeLa细胞发生凋亡的活性。结论:旋复花中化合物具有明显的抑制妇科肿瘤细胞增殖活性;异土木香内酯抑制HeLa细胞增殖作用有可能是通过促细胞凋亡机制而实现的。肿瘤的发生和细胞增殖与凋亡平衡失调有关。细胞凋亡与肿瘤的发生、发展和退化密切相关。诱导肿瘤细胞凋亡是近年肿瘤治疗研究的一个新靶点。旋复花中化合物对于体外人子宫颈癌细胞株、人子宫内膜癌细胞株以及人卵巢癌细胞株具有高效、特异的杀瘤效应。随着对宫颈癌、子宫内膜癌发病机制及卵巢癌化疗药物耐药机制认识的进一步加深,妇科肿瘤的治疗迈上了一个新的台阶。旋复花中化合物为宫颈癌、子宫内膜癌及耐药性卵巢癌,提供了一个新的治疗策略,是目前化学预防和治疗肿瘤研究的热点之一,有希望成为一种具有广泛应用前景的抗癌新药。