甘草中黄酮类有效成分的提取、含量测定和抗氧化性研究

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甘草中的主要有效成分为皂苷类和黄酮类,异甘草素和甘草素作为黄酮类中两种重要的化合物,具有抗炎、抗HIV、抗肿瘤等多种药理作用,因此具有广阔的开发及应用前景。本课题通过对甘草中黄酮类化合物的有效富集,参照2010版药典测定甘草中甘草酸含量的方法,建立同时测定异甘草素和甘草素含量的方法,并对两者的抗氧化活性做了进一步的研究。1.通过超声辅助提取甘草中总黄酮并对其提取工艺条件进行优化。实验以甘草中总黄酮得率为检测指标,采用均匀设计法确定甘草中总黄酮的最佳提取工艺条件为:甲醇体积分数70%、超声时间30min、固液比1:20(g/mL),甘草中总黄酮的最大得率为3.28%。2.采用高效液相色谱法等度洗脱和检测波长时间序列采样的方法,同时测定甘草中异甘草素和甘草素的含量。具体色谱条件为:色谱柱Hyporsil ODS2(4.6mm×250mm,5μm);检测波长时间序列0~25min是276nm,25~70min是360mn;流动相CH3OH: H2O=45:55(v/v);流速0.8mL/min;进样量10μL。异甘草素(R2=0.9996)和甘草素(R2=0.9991)具有良好的线性关系,其平均加样回收率分别为97.9%和98.3%,RSD分别为1.3%和1.64%。3.采用响应曲面法中Box-Behnken研究甲醇体积分数、固液比、超声时间对异甘草素得率的影响,并建立该工艺的二次多项式数学模型。最佳提取条件为:甲醇体积分数70%,超声时间35min,固液比1:18(g/mL),异甘草素的最佳得率为0.3%。结果显示该回归模型(R2=0.9446,P<0.0001)线性关系良好,且具有高度显著性,可对异甘草素的得率进行有效分析和合理预测。4.利用紫外-可见分光光度法,以维生素C和BHT为阳性对照,研究了异甘草素和甘草素对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH的清除作用。结果显示,四种化合物对三种自由基均具有一定的清除作用,而且维生素C的清除作用最强,异甘草素次之,甘草素较差,BHT最差。
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