赫坎按蚊复合体是我国复杂而重要的按蚊亲缘种类群,其种类多、分布广,某些成员种又被证明是分布地疟疾和丝虫病的传播媒介,该复合体成员种外部形态相似,常规鉴别多有混淆及错误。本课题旨在应用分子生物学技术,对赫坎按蚊复合体部分种类进行分子鉴别研究,并从分子水平上对中华按蚊的种群遗传多态性进行研究。 本研究首先选用对按蚊近缘种有鉴别意义的核糖体DNA第2内转录间隔区（rDNA-ITS2）序列,对采自陕西丹凤、江苏无锡、沈阳法库和四川蒲江的中华按蚊,江苏盱眙的嗜人按蚊,山东荣成的八代按蚊进行克隆测序,所得ITS2序列长度分别为468bp（丹凤、蒲江、无锡的中华按蚊）、462bp（法库的中华按蚊）、452bp（嗜人按蚊）及459bp（八代按蚊）;GC含量为53.63%-55.19%。对各蚊的ITS2序列进行同源对比排序,结果显示:丹凤、蒲江和无锡的中华按蚊序列无差异,说明ITS2序列在种内保守;中华按蚊与嗜人按蚊、八代按蚊的序列差异分别为28.8%和17.13%,嗜人按蚊与八代按蚊的差异为15.18%,说明ITS2序列在种间差异较大;但将法库中华按蚊与上述中华按蚊相比差异为20.97%,是种间差异,若与嗜人按蚊相比差异较小为3.83%,属种内变异,这一对比结果说明:法库中华按蚊应确认为嗜人按蚊,常规鉴定存在混淆。 本研究基于以上中华按蚊与嗜人按蚊的ITS2序列,再行设计种特异引物,应用PCR技术扩增种特异片段（中华按蚊425bp,嗜人按蚊252bp）,进一步对中华按蚊和嗜人按蚊进行鉴别。先后检测了中华按蚊和嗜人按蚊3个实验室品系70例,均显示单一的种特异扩增带;检测了采自我国10省12个不同地点、被常规鉴定为“中华按蚊”的标本440例,具中华按蚊种特异扩增带的占66.1%,表明检测样本中混有其他蚊种;检测了采自四川省2地经卵鉴定的嗜人按蚊标本20例,全部具种特异扩增带;而对照组凉山按蚊、贵阳按蚊和帕氏按蚊9例全部无扩增。