【摘 要】
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呼吸道感染是世界范围的常见病、多发病,主要是由各种呼吸道病毒以及-些细菌、支原体、衣原体和立克次体等引起,病毒中常见的是流感病毒(甲、乙、丙各型)、鼻病毒、腺病毒、
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呼吸道感染是世界范围的常见病、多发病,主要是由各种呼吸道病毒以及-些细菌、支原体、衣原体和立克次体等引起,病毒中常见的是流感病毒(甲、乙、丙各型)、鼻病毒、腺病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒等。其临床表现相似,如流涕,全身发热等。本试验拟建立快速、可同时检测多种呼吸道病毒的PCR-MassARRAY技术,探讨质谱技术在呼吸道病毒临床检测中的应用价值,为呼吸道病毒感染提供一种特异、高通量的诊断方法。具体步骤是首先根据GenBank录入的17种呼吸道病毒全基因组序列,应用生物信息学技术设计PCR扩增引物和延伸引物,通过优化各种反应条件,建立检测呼吸道病毒的PCR-MassARRAY技术。通过检测同一症侯群的不同病毒,确定本方法的特异性;通过定量检测阳性质粒,确定本方法的灵敏度。在此基础上,应用临床标本进一步验证所建立的呼吸道病毒PCR-MassARRAY技术的实际检测效果。标本来源于2009年10月17日-2010年11月27日期间收集的110份疑似甲型流感病毒感染的鼻咽拭子标本(NPS)针对每份标本同时采用WHO推荐的实时荧光定量PCR方法进行检测,并对PCR扩增结果进行序列测定分析。结果显示针对甲型流感病毒,PCR-MassARRAY技术与WHO推荐的实时荧光定量PCR技术的一致率达到94.54%(P>0.05),灵敏度与特异性分别是96.43%和92.59%。除检出甲型流感病毒以外,利用PCR-MassARRAY技术还从这批样本中检测出多重感染13例,共检测出7种病原体。本研究显示PCR-MassARRAY检测技术具有高敏感度、高特异度、高通量的优点,适用于临床呼吸道病毒的检测,尤其适用于大规模的呼吸道病毒的筛查和流行病学调查研究。
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