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目的：探索用人角质形成细胞(Keratinocytes，KCs)和黑素细胞(Melanocytes，MCs)混合培养接种于去表皮的真皮(De-epidermized dermis，DED)，体外构建含黑素的组织工程皮肤。 方法：1.采用两步酶消化法处理健康小儿包皮，获得表皮细胞悬液，分别用角质形成细胞无血清培养基(keratinocytes-SFM)及改良的M254黑素细胞培养基培养KCs、MCs。2.分别将KCs、MCs传至第3代，将KCs接种于培养瓶中，48h后加入MCs(MCs∶KCs为1∶10)混合培养。3.制备人去表皮的真皮(DED)，将培养第3代的MCs、KCs制成细胞悬液，按照1∶10的比例接种于DED表面，采用液下培养和空气一液面培养相结合的方式进行培养，2周后取培养的组织工程皮肤分别做HE染色、角蛋白免疫组化染色及Masson-Fontana染色，并取正常人皮肤做Masson-Fontana染色作为阳性对照。 结果：1.KCs、MCs混合培养于培养皿5天后，于倒置显微镜下观察到KCs呈铺路石状生长，其间散布MCs，MCs树突延伸到KCs细胞间。2.两种细胞混合接种于DED，15天后HE染色显示在DED上有3～6层表皮细胞，并可见角质层，角蛋白免疫组化染色阳性，Masson-Font ana染色显示基底层见黑素着色。 结论：MCs、KCs混合接种于培养皿可构建MCs和KCs接触生长的单细胞层，将MCs、KCs接种于DED可构建含有黑素成分的组织工程皮肤。