燃料乙醇已经成为全球公认的汽油替代燃料,在其快速发展的同时,其主要生产菌株酵母的技术性研发也得到了一定程度的发展。在乙醇的发酵过程中,当发酵醪液的温度超过38℃时,就必须使用冷却水进行降温,否则就会对酿酒酵母的活性产生抑制,影响乙醇的产率以及还原糖的利用率,增大生产成本。高温发酵具有发酵速度快、更适用于同步糖化发酵工艺、缩短发酵周期、节省冷却水用量、降低发酵原料黏度、降低生产成本等优点,因此,选育耐高温的酿酒酵母菌株在工业应用方面具有重要意义。本研究在酿酒酵母AY12的基因背景下,结合分子改造、ARTP离子诱变、基因组重排以及高温驯化等育种手段,选育耐高温酿酒酵母。主要研究内容及结果如下:(1)通过35℃的同步糖化发酵结果以及48h细胞存活率测定结果,选定从工业菌种中分离出来的酿酒酵母菌株AY12-G作为亲本菌株,分离单倍体以及对单倍体发酵性能进行测定,最终选定AY12a作为出发菌株进行CYR1基因启动子梯度弱化实验,构建了一系列CYR1基因启动子3’端部分缺失的突变株AY12a-60、AY12a-90、AY12a-120,与筛选出来的α型单倍体融合成双倍体AY12-60、AY12-90、AY12-120,并对菌株进行40℃高温生长测定以及35℃同步糖化发酵测定和48h细胞存活率测定,分析结果发现,比之亲本菌株AY12-G,CYR1启动子梯度弱化菌株的48h细胞存活率几乎没有提升,35℃同步糖化发酵性能也没有明显变化。(2)以从工业菌种中分离出来的菌株AY12-G作为出发菌株,对其进行ARTP等离子诱变,在37℃条件下进行初筛,共获得150株单菌落长势比较好的菌株,将150株菌进行产孢、杂交以实现基因组重排,37℃条件下初筛后,获得137株生长性能良好的菌株。对这137株菌进行35℃玉米水解液发酵,通过发酵性能测定,共筛选出14株菌,将14株菌进行35℃同步糖化发酵实验以及测定48h细胞存活率,最终筛选出7株高温发酵性能以及48h细胞存活率有所提升的菌株,对这7株菌进行41℃以及42℃的高温驯化,最终获得一株高温发酵性能优良,48h细胞存活率显著提升的菌株X-130。由于X-130的发酵周期比之AY12-G延长了24h,故对同步糖化发酵的培养基进行处理方法上的改变,添加酸性蛋白酶以求缩短其发酵周期。结果表明,培养基添加酸性蛋白酶进行处理后,与出发菌株AY12-G相比,X-130在48h的细胞存活率提升了 84.68%,35℃同步糖化发酵性能并没有明显变化,发酵周期得以缩短12h。