猪精子在液态保存过程中葡萄糖代谢的研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 12次 | 上传用户:yuandt
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精液液态保存技术对猪人工授精的推广及养猪业发展至关重要,但目前还存在着稀释液成分复杂,保存时间不长,效果不稳定等问题亟待解决。有效提供能量和消除如离子成分、代谢性酸中毒、顶体反应及自发获能等不利因素是延长精液液态保存时间的两个关键问题。然而,目前关于射精精子在体外长时间培养期间的糖代谢研究尚少,不同物种精子PPP途径是否存在,三羧酸循环是否必需,尚无结论。因此,研究猪精液液态保存过程中精子的葡萄糖代谢无论对于丰富精子能量代谢的基础理论,还是对于延长精液液态保存时间、提高人工授精效率,都具有重要理论和实践意义。本研究拟采用不含任何能量物质的磷酸缓冲盐溶液(PBS)为基础稀释液,通过添加葡萄糖和糖代谢中间产物以及糖酵解、PPP途径和电子传递的抑制剂,不同温度下液态保存猪精液不同时间检测精子活力、活率、顶体完整率等指标,研究猪精液液态保存过程中精子对葡萄糖的利用和代谢途径,并在此基础上研制出改进精子能量代谢精液保存体系,延长猪精液液态保存时间。结果发现:(1)与5℃、25℃C相比,猪精液以15℃保存效果最好,精子活力保持在30%以上的保存时间达到4天。成功建立一种成分简单、明确的又适合精子糖代谢研究的保存系统。(2)猪精液在15℃保存时,稀释液中添加钙、镁离子缩短了保存时间,不利于猪精子的存活。(3)猪精液在15℃保存时,稀释液中添加3mM的葡萄糖效果最好,精子活力保持30%以上的保存时间达到5天。(4)猪精液在15℃保存时,稀释液中添加5mmM的丙酮酸钠效果最好,精子活力保持30%以上的保存时间达到5天。(5)猪精液在15℃保存时,在含有葡萄糖的稀释液中添加碘醋酸钠,阻断精子糖酵解途径能够显著降低精子活力和保存时间。(6)猪精液在15℃保存时,在含有葡萄糖的稀释液中添加6-氨基烟酰胺,阻断精子糖代谢的磷酸戊糖途径,不影响精子活力和保存时间。(7)猪精液在15℃保存时,在含有葡萄糖的稀释液中添加鱼藤酮,阻断精子氧化磷酸化电子传递呼吸链的功能能够显著降低精子活力和保存时间。通过本研究得出以下结论:(1)与5℃、25℃相比,猪精液在体外液态保存以15℃保存效果最好。(2)钙、镁离子不利于猪精液液态保存。(3)猪精液在15℃保存时,稀释液中添加3mM的葡萄糖有利于猪精子的存活,添加过量的葡萄糖对猪精子的存活有害。(4)猪精子除了能够利用葡萄糖外,还能够利用丙酮酸。(5)15℃下液态保存过程中,猪精子葡萄糖代谢似乎不依赖于的磷酸戊糖途径,糖酵解途径及有氧氧化途径可能都参与猪精子活力的维持。
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