论文部分内容阅读
旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病，其分布几乎遍及全球各地。该病不仅严重危害人体健康，而且还给畜牧业及食品工业带来重大的经济损失，所以及时准确的诊断并治疗旋毛虫病显得至关重要。鉴于旋毛虫病的危害性，研制敏感性高、特异性强的旋毛虫病诊断试剂和保护性高的基因工程抗体，对于防治旋毛虫病有重要的实际意义。本研究选用pET-30a表达载体表达本地毛形线虫49ku ES抗原，利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，为建立检测旋毛虫循环抗原方法和旋毛虫病早期诊断试剂盒及基因工程抗体的研制提供理想、必备的试验材料。利用本地毛形线虫49ku ES重组蛋白免疫Balb／C小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株，制备腹水进行纯化。采用间接ELISA方法测定杂交瘤细胞上清液和小鼠腹水效价；用Southern Biotechnology Associates，Inc的SBA ClonotypingTMSystem／AP对单克隆抗体进行亚类鉴定；Dot-ELISA和Western blot试验检测单克隆抗体的特异性；间接ELISA方法检测单克隆抗体与日本血吸虫成虫抗原、猪囊尾蚴囊液抗原、猪蛔虫抗原、猪鞭虫抗原是否存在交叉反应。结果表明：获得两株抗ES49ku ES重组蛋白杂交瘤细胞株，分别命名为D5和C1；两株杂交瘤细胞上清液和腹水效价均达到1∶1280和1∶12800；均能稳定分泌敏感性强高、特异性强高的IgM类McAb，轻链为κ链；两株单克隆抗体均能特异性识别约49ku处的24h ES抗原；且不与日本血吸虫成虫抗原、猪囊尾蚴囊液抗原、猪蛔虫抗原、猪鞭虫抗原反应发生交叉反应。单克隆抗体的获得为旋毛虫病的研究和建立检测旋毛虫循环抗原方法奠定了基础。