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三序基蛋白(TRIMs)是一个在先天免疫、细胞分化、转录调节以及细胞凋亡等多种生物学进程中有重要作用的蛋白家族。TRIM25蛋白是重要的干扰素诱导基因(ISGs)基因之一,在病毒感染过程中,TRIM25蛋白可以通过促进维甲酸诱导基因I(RIG-I)和线粒体信号蛋白(MAVs)的相互作用和信号传递诱导IFNs的转录和表达。本研究从鹅肺脏组织内克隆获得了鹅TRIM25基因序列,并从鹅TRIM25蛋白分子对IFNs和ISGs的转录调控及其对不同病毒的抑制作用等多方面探索了鹅TRIM25蛋白的生物学特性和抗病毒功能。1.鹅TRIM25序列鉴定及其结构特征本研究从四川白鹅肺脏组织内克隆得到鹅TRIM25基因序列(GenBank序列号:KX364385),该序列全长1892 bp,包括1662 bp的开放阅读框,编码一个554氨基酸的蛋白质。分子进化树和序列比对发现,鹅TIRM25基因与其他物种,尤其是禽类的TRIM25序列有很高的相似性。鹅TRIM25蛋白与鸭和火鸡聚在一簇,且鹅与鸭亲缘关系最近。绝大部分参与比对TRIM25蛋白RING结构域氨基酸序列符合CX2CX(9-39)CX(1-3)HX(2-3)C/HX2CX(4-48)CX2C锌指结构特征。2.鹅TRIM25的组织表达谱及其免疫学特性本研究利用荧光定量的方法检测鹅TRIM25在体内和体外的表达规律。结果显示:除血液外,鹅TRIM25基因在哈德氏腺、盲肠扁桃体和胸腺等免疫相关组织中表达量较高。在雏鹅法氏囊内,TRIM25表达量较高,而在3月龄鹅法氏囊内,其表达量相对较低。qPCR结果显示,不同的刺激剂以及病毒感染都能够显著性上调鹅TIRM25基因转录水平。这些材料证明鹅TRIM25参与宿主抗病毒免疫调节。3.TRIM25蛋白对病毒增殖能力的影响为了调查TRIM25蛋白对水禽DNA病毒(选择DPV病毒为代表)增殖的影响,本研究在DEFs中表达鹅TRIM25蛋白(GoTRIM25)和鸭RING结构域与鹅TRIM25融合蛋白(DuR-GoTRIM25),24小时后感染DEFs适应DPV病毒,并在感染后24小时和48小时观察细胞中荧光信号的多少和强弱结果显示。结果显示:DuR-GoTRIM25可以有效抑制DPV病毒增殖。为了调查TRIM25蛋白对水禽RNA病毒(以NDV病毒为代表)增殖的影响,本研究在DEF中表达GoTRIM25和DuRING-GoTRIM25蛋白,24小时后感染NDV病毒,并在感染后24小时和48小时收集细胞毒。qPCR结果显示,在病毒感染后24和48小时,GoTRIM25蛋白组细胞内病毒拷贝数与对照组无显著差异;而在DuR-GoTRIM25蛋白组,NDV病毒拷贝数与对照组相比显著性下降。说明:DuR-GoTRIM25可以有效抑制NDV病毒在体内的增殖。4.TRIM25蛋白对IFNs和ISGs基因转录的影响本研究在DEFs中表达GoTRIM25和DuR-GoTRIM25蛋白,然后利用qPCR技术检测IFNs和ISGs基因转录水平的变化。结果显示,GoTRIM25蛋白组与对照组相比,IFNs和ISGs基因转录水平并无显著性差异,而DuR-GoTRIM25蛋白组与对照组相比,无论是IFNs还是ISGs基因转录水平都显著性提高。说明:DuR-GoTRIM25可以有效的诱导宿主IFNs介导的抗病毒免疫反应。