【摘 要】
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研究目的:(1)探究糖尿病小鼠血液中TNF-α对小鼠血糖代谢的影响;(2)探究microRNA-320与胰岛素抵抗的关联性,以及吡格列酮的干预作用。研究方法:(1)①TNFR1和TNFR2(肿瘤坏死因
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研究目的:(1)探究糖尿病小鼠血液中TNF-α对小鼠血糖代谢的影响;(2)探究microRNA-320与胰岛素抵抗的关联性,以及吡格列酮的干预作用。研究方法:(1)①TNFR1和TNFR2(肿瘤坏死因子受体1和2)双敲除小鼠经过高脂诱导后,通过葡萄糖耐量试验以及胰岛素耐量试验检测小鼠血糖代谢的变化;②检测小鼠血液中TNF-α的表达水平变化,评估糖尿病小鼠血液中TNF-α水平和小鼠血糖代谢的关系;③通过腺相关病毒AAV-shTNF-α尾静脉注射降低TNFR1和TNFR2双敲除小鼠血液中TNF-α的表达水平,检测TNFR1和TNFR2双敲除小鼠血糖代谢的变化;④通过腺病毒AAV-TNF-α注射提高ob/ob小鼠血液中TNF-α的表达,检测ob/ob小鼠血糖代谢的变化,证实糖尿病小鼠血液中TNF-α与小鼠血糖代谢的关系,并探究该过程的机制;(2)①诱导分化3T3-L1前脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型,葡萄糖氧化酶法检测细胞上清葡萄糖含量,计算葡萄糖摄入量变化,qPCR检测分化后脂肪细胞中microRNA-320的表达水平变化;②分别用不同浓度(1uM,10uM,50uM,100uM,150uM)吡格列酮干扰胰岛素抵抗的脂肪细胞,不同时间点(12h,24h,48h,72h)胰岛素抵抗程度变化以及microRNA-320表达水平的变化;实验结果:(1)①TNFR1和TNFR2双敲除的小鼠高脂饮食诱导后,其血糖代谢较对照组小鼠明显好转;②TNFR1和TNFR2双敲除小鼠血浆中TNF-α表达水平升高;③腺相关病毒注射降低TNFR1和TNFR2双敲除小鼠血液中TNF-α表达水平后,TNFR1和TNFR2双敲除小鼠血糖代谢恶化;④腺相关病毒注射升高ob/ob小鼠血液中TNF-α表达水平后,ob/ob小鼠血糖代谢改善;(2)①3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为胰岛素抵抗的脂肪细胞后,葡萄糖摄取量降低,细胞内的microRNA-320表达量明显升高;②吡格列酮处理胰岛素抵抗脂肪细胞后,脂肪细胞葡萄糖摄取量增加,microRNA-320表达量显著下降。实验结论:(1)①TNFR1和TNFR2双敲除改善糖尿病小鼠血糖代谢;②糖尿病小鼠血浆中TNF-α对小鼠血糖调节起重要作用;③TNF-α对糖尿病血糖代谢的调节不是通过TNF-α/TNFRs 信号通路,而是通过TNFR1、TNFR2非依赖的方式;④TNF-α的受体不止TNFR1和TNFR2两个,新的受体有待被发现。(2)①胰岛素抵抗的脂肪细胞中microRNA-320表达量显著升高;②microRNA-320可能是吡格列酮改善胰岛素抵抗的潜在靶点。
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