人源诺如病毒细胞表面展示体系的构建与应用

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人源诺如病毒(human noroviruses,HuNoVs)是引发人类急性胃肠炎的重要病原体之一;主要流行株为GII.4基因型。生菜、牡蛎等为其主要传播载体。由于缺乏成熟的体外培养模式和动物模型,阻碍了HuNoVs的研究进展。因此,发掘HuNoVs的受/配体成为破解该瓶颈的重要途径。在前期研究基础上,本研究在锚定蛋白编码基因(inaQn)和HuNoV(GII.4)主要衣壳蛋白P结构域编码基因之间插入一段编码凝血酶识别位点的核酸片段,构建升级版“假HuNoV”。经凝血酶处理后,大肠杆菌表面展示的P蛋白可与菌体分离,且解离的P蛋白可自动折叠成P颗粒。ELISA结果表明:所解离的P蛋白具备识别并结合HuNoVs特异性受体——组织血型抗原(Histo-blood group antigens,HBGAs)的能力。“假HuNoV”与HBGAs孵育,处理后可获得P蛋白-HBGAs复合物。ELISA结果表明:该体系可特异性捕获A型HBGA。将升级版“假HuNoV”与生菜提取物孵育,处理后可获得P蛋白-病毒配体的复合物。ELISA结果显示:生菜中含有可被A、H1和Lewis a型HBGA单克隆抗体所识别的配体。氧化试验表明:生菜的叶片和叶脉中均含有HuNoV(GII.4)的多糖配体。HPLC结果表明:该配体由甘露糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖和木糖构成。综上,升级版“假HuNoV”可用于宿主细胞中病毒受体的发掘与分析,为构建该病毒体外增殖模式提供技术支撑。
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