睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)是一种能够降解类固醇的革兰氏阴性细菌,其代谢过程有20几种酶共同参与,近年关于睾丸酮丛毛单胞菌的生物修复作用及酶基因表达调控成为很多学者关注热点。SDRx短链脱氢酶是睾丸酮丛毛单胞菌中一种重要的激素降解酶。本文通过重组质粒的构建、酶联免疫吸附、高效液相色谱、质粒共转化等方法研究睾丸酮丛毛单胞菌中三种调控蛋白(LysR、LuxR、TetR)对SDR的生物学作用。通过构建SDRx基因蛋白表达载体;利用大肠杆菌BL21(DE3)plysS菌株进行原核表达并纯化目的蛋白;利用纯化的蛋白制备小鼠多克隆抗体,利用ELISA的检测方法测定抗体效价并绘制标准曲线;利用基因同源重组及移码突变的原理构建睾丸酮丛毛单胞菌SDRx基因敲除突变株,并利用HPLC检测其在五种不同激素培养条件下,LB培养基中所剩余激素含量;将含有三种调控蛋白的重组质粒与含有107启动子的SDRx重组质粒共转化到HB101菌株中,加激素诱导并提取共转化菌株总蛋白,利用ELISA的方法检测共转化菌株中SDRx的表达量。实验结果表明:成功克隆了SDRx基因并表达及纯化了SDRx蛋白,检测蛋白浓度达116.66μg/mL;成功制备效价较高的SDRx小鼠多克隆抗体,效价达到1:8000;SDRx基因影响睾丸酮丛毛单胞菌对激素的分解能力,其影响程度睾丸酮>孕酮>甲睾酮>雌酮>雌二醇;在睾丸酮丛毛单胞菌中LysR调控蛋白对SDRx脱氢酶几乎无作用。LuxR和TetR调控蛋白对SDRx脱氢酶起抑制作用,其中孕酮诱导的条件下TetR调控蛋白的抑制作用更强,是LuxR调控蛋白的一倍。本文的实验结果为睾丸酮丛毛单胞菌在自然界中类固醇激素的生物降解及基因调控研究提供实验依据。