黄帝手植柏的组织培养和硝酸还原酶活性测定

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侧柏(Platyciadus orientalis(L.) Franco)是柏科侧柏属(Platycladus)单种属乔木,原产我国北部及西北部,是中国分布最广的针叶树种(黄礼梅等2007)。侧柏因为耐干旱和瘠薄的特性,一直是我国北方荒山造林的先锋树种,也是园林绿化的重要树种(常世光等2011)。陕西省黄帝陵内的古侧柏群大约有82000多株,千年以上古柏约有30000余株,是全国最大面积的古侧柏林(黄锡梅2006)。目前,古侧柏林由于树龄的老化,根吸收水分和养料的能力不能满足生长需要,加之外界多种因素的侵袭导致树体受到不同程度的侵蚀(魏胜林等2011)。本文所用实验材料取自树龄约3000年的黄帝陵黄帝手植柏,树体已进入衰老阶段,种子虽可育苗但不能保留全部优良性状,而组织培养不受季节、取材数量等方面的限制,并能保留古柏全部优良性状,保持其濒危种质资源,对扩繁和保护古树优良资源也具有重要的参考价值。主要研究结果如下:1、茎段组织培养的研究以黄帝手植柏的幼嫩鳞叶茎段为外植体进行组织培养研究,得出结论:黄帝手植柏宜在4月份选取幼嫩不带木质化部分的茎段,经预处理后,75%酒精30s+0.1%氯化汞12min+无菌水冲洗3~4次。生长素NAA、细胞分裂素6-BA和椰乳在茎段组培整个过程中发挥着重要的作用,NAA、6-BA与其它激素(KT、GA3、2,4-D)组合对组培影响不大。初代培养的最适培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.2mg/L+椰乳100mL,存活率可达42.6%;继代的最适培养基为1/4MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.2、0.4mg/L+椰乳200mL;生根试验中,1/2WPM基本培养基、两步生根法、活性炭和黑暗培养都对古侧柏的组织培养存在消极影响,NAA和IBA组合对再生芽生根有一定促进作用。2、继代弱化现象恢复的研究对继代三次以上的外植体弱化、褐化现象的处理:降低培养基盐浓度为1/4MS,琼脂至6g/L,增加椰乳含量至150mL以上,各激素浓度均不能超过0.4mg/L。3、硝酸还原酶活性的研究本试验以三个年龄梯度的侧柏(3000年生,30~40年生和3~5年生)为研究对象,测量其组培前后硝酸还原酶活性的变化。试验表明,组织培养能促进不同年龄的侧柏体内硝酸还原酶活性上升,而且随年龄增大上升幅度增加,且古侧柏的酶活性能恢复到较为幼嫩的树体程度。
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