IL-10对心力衰竭患者外周血单个核细胞促炎性细胞因子分泌和核转录因子κB活化的影响

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wll_wyx
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目的:探讨心力衰竭(heartfailure,HF)患者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)活化与促炎性细胞因子(cytokinesCK)分泌的相关性;白细胞介素10(interleukin10,IL-10)对HF患者PBMCs促炎性细胞因子分泌和NF-κB活化的影响及IL-10抑制细胞因子的可能机制,为IL-10应用于治疗HF提供理论依据。 方法:①取15例心力衰竭患者和15例正常人(健康对照组)的清晨空腹外周静脉血8ml,肝素抗凝,4ml血液用于提取血清检测细胞因子。另4ml外周静脉血用淋巴细胞分离液分离PBMCs,用含10%小牛血清的1640培养基调整细胞数量为2×107/ml,取30ul细胞悬液涂在载玻片上,室温下风扇吹干,纯丙酮固定30分钟,干燥后保存,用于检测NF-κB活性。②取15例HF患者和15例正常人清晨外周静脉血8ml,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,每组15例,分三组对PBMCs进行培养:第一组用含10%小牛血清、100u/ml青霉素和100mg/ml链霉素的1640培养基培养作为空白对照组;第二组用含有10%小牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml链霉素和LPS(1ug/ml)的1640培养基作为LPS组。第三组用含有10%小牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml链霉素、LPS(1ug/ml)和IL-10(10ng/ml)的培养基培养作为IL-10干预组。把含有PBMCs的培养板放在含5%二氧化碳的孵箱中37℃孵育24小时,收集培养液离心,吸取上清液用于检测细胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6),对余下的PBMCs进行收集,用1640培养基调整细胞数为2×107,取30ul细胞悬液涂于载波片上,室温风扇吹干,纯丙酮固定30分钟,保存待测,用于检测NF-κB活性,PBMCs的NF-κB活性用免疫组化染色检测,血清及培养上清液细胞因子的含量由放射免疫法测定。对指标进行t检验及相关分析。 结果:①HF患者外周血TNF-a、IL-6含极显著高于对照组(2.34±0.51ng/LVS1.70±0.58ng/L,164.88±17.58pg/LVS44.91±29.41pg/L,P<0.01);IL-1β含量显著高于健康对照组(0.90±0.22ng/LVS0.72±0.17ng/L,P<0.05)。心衰患者外周血单个核细胞NF-κB核染色阳性百分率极显著高于健康对照组(25%±13%VS8%±4%,P<0.01)。通过相关分析发现:外周血单个核细胞NF-κB核染色阳性百分率与IL-1β、TNF-a、IL-6均呈显著正相关(相关系数r值分别为0.369,0.465,0.866,P值分别为<0.05,<0.01,<0.01);②HF患者PBMCs体外培养上清液的细胞因子水平:LPS组比空白组TNF-a、IL-1β极显著升高(29.03±21.50ng/LVS10.63±5.21ng/L,2.30ng/L±1.65ng/LVS0.95±0.36ng/L,P<0.01);IL-6呈极显著升高(2084.57±1850.50pg/LVS697.41±425.41pg/L,P<0.05)。IL-10组比LPS组TNF-a显著降低(15.20±10.80ng/LVS29.03±21.50ng/L,P<0.05);IL-1β、IL-6呈极显著降低(0.73±0.48ng/LVS2.30±1.65ng/L,670.83±664.36pg/LVS2084.57±1850.50pg/L,P<0.01)。心衰患者体外培养的单个核细胞NF-κB胞核染色阳性率:LPS组比空白组极显著升高(38%±9%VS22%±8%,P<0.01);IL-10组比LPS组极显著降低(18%±7%VS38%±9%,P<0.01)。通过相关分析发现:心衰患者体外培养的PBMCs的NF-κB核染色阳性百分率与IL-1β、TNF-a、IL-6呈显著正相关(相关系数r值分别为0.323、0.310、0.723,P值分别为<0.05、<0.05、<0.01)。③健康组正常人PBMCs体外培养上清液细胞因子:LPS组比空白组TNF-a、IL-6显著升高(15.47±11.65ng/LVS1.79±1.36ng/L,760.13±549086pg/LVS329.32±280.57pg/L,P<0.05);IL-1β极显著升高(0.86±0.27ng/LVS0.60±0.18ng/L,P<0.01);IL-10组比LPS组TNF-a、IL-6显著降低(4.82±2.83ng/LVS15.47±11.65ng/L,360.93±326.32pg/LVS760.13±549.86pg/L,P<0.05);IL-1β极显著降低(0.43±0.18ng/LVS0.86±0.27ng/L,P<0.01)。其培养的PBMCs的NF-κB核染色阳性百分率:LPS组比空白组极显著升高(27%±13%VS9%±2%,P<0.01);IL-10组比LPS组显著降低(16%±9%VS27%±13%,P<0.05)。通过相关分析发现:健康正常人培养的PBMCs的NF-κB核染色阳性百分率与IL-1β、TNF-a、IL-6呈显著正相关(相关系数r值分别为0.301、0.792、0.327,P值分别为<0.05、<0.01、<0.05); 结论:①心力衰竭患者NF-κB表达增高,细胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6)分泌增多。在心力衰竭患者,可能通过NF-κB表达的上调促进细胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6)的分泌。②IL-10可下调细胞因子的分泌以及降低NF-κB的活化,IL-10可能通过下调NF-κB活化来降低促炎性细胞因子的分泌。
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