论文部分内容阅读
目的:探讨心力衰竭(heartfailure,HF)患者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)活化与促炎性细胞因子(cytokinesCK)分泌的相关性;白细胞介素10(interleukin10,IL-10)对HF患者PBMCs促炎性细胞因子分泌和NF-κB活化的影响及IL-10抑制细胞因子的可能机制,为IL-10应用于治疗HF提供理论依据。
方法:①取15例心力衰竭患者和15例正常人(健康对照组)的清晨空腹外周静脉血8ml,肝素抗凝,4ml血液用于提取血清检测细胞因子。另4ml外周静脉血用淋巴细胞分离液分离PBMCs,用含10%小牛血清的1640培养基调整细胞数量为2×107/ml,取30ul细胞悬液涂在载玻片上,室温下风扇吹干,纯丙酮固定30分钟,干燥后保存,用于检测NF-κB活性。②取15例HF患者和15例正常人清晨外周静脉血8ml,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,每组15例,分三组对PBMCs进行培养:第一组用含10%小牛血清、100u/ml青霉素和100mg/ml链霉素的1640培养基培养作为空白对照组;第二组用含有10%小牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml链霉素和LPS(1ug/ml)的1640培养基作为LPS组。第三组用含有10%小牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml链霉素、LPS(1ug/ml)和IL-10(10ng/ml)的培养基培养作为IL-10干预组。把含有PBMCs的培养板放在含5%二氧化碳的孵箱中37℃孵育24小时,收集培养液离心,吸取上清液用于检测细胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6),对余下的PBMCs进行收集,用1640培养基调整细胞数为2×107,取30ul细胞悬液涂于载波片上,室温风扇吹干,纯丙酮固定30分钟,保存待测,用于检测NF-κB活性,PBMCs的NF-κB活性用免疫组化染色检测,血清及培养上清液细胞因子的含量由放射免疫法测定。对指标进行t检验及相关分析。
结果:①HF患者外周血TNF-a、IL-6含极显著高于对照组(2.34±0.51ng/LVS1.70±0.58ng/L,164.88±17.58pg/LVS44.91±29.41pg/L,P<0.01);IL-1β含量显著高于健康对照组(0.90±0.22ng/LVS0.72±0.17ng/L,P<0.05)。心衰患者外周血单个核细胞NF-κB核染色阳性百分率极显著高于健康对照组(25%±13%VS8%±4%,P<0.01)。通过相关分析发现:外周血单个核细胞NF-κB核染色阳性百分率与IL-1β、TNF-a、IL-6均呈显著正相关(相关系数r值分别为0.369,0.465,0.866,P值分别为<0.05,<0.01,<0.01);②HF患者PBMCs体外培养上清液的细胞因子水平:LPS组比空白组TNF-a、IL-1β极显著升高(29.03±21.50ng/LVS10.63±5.21ng/L,2.30ng/L±1.65ng/LVS0.95±0.36ng/L,P<0.01);IL-6呈极显著升高(2084.57±1850.50pg/LVS697.41±425.41pg/L,P<0.05)。IL-10组比LPS组TNF-a显著降低(15.20±10.80ng/LVS29.03±21.50ng/L,P<0.05);IL-1β、IL-6呈极显著降低(0.73±0.48ng/LVS2.30±1.65ng/L,670.83±664.36pg/LVS2084.57±1850.50pg/L,P<0.01)。心衰患者体外培养的单个核细胞NF-κB胞核染色阳性率:LPS组比空白组极显著升高(38%±9%VS22%±8%,P<0.01);IL-10组比LPS组极显著降低(18%±7%VS38%±9%,P<0.01)。通过相关分析发现:心衰患者体外培养的PBMCs的NF-κB核染色阳性百分率与IL-1β、TNF-a、IL-6呈显著正相关(相关系数r值分别为0.323、0.310、0.723,P值分别为<0.05、<0.05、<0.01)。③健康组正常人PBMCs体外培养上清液细胞因子:LPS组比空白组TNF-a、IL-6显著升高(15.47±11.65ng/LVS1.79±1.36ng/L,760.13±549086pg/LVS329.32±280.57pg/L,P<0.05);IL-1β极显著升高(0.86±0.27ng/LVS0.60±0.18ng/L,P<0.01);IL-10组比LPS组TNF-a、IL-6显著降低(4.82±2.83ng/LVS15.47±11.65ng/L,360.93±326.32pg/LVS760.13±549.86pg/L,P<0.05);IL-1β极显著降低(0.43±0.18ng/LVS0.86±0.27ng/L,P<0.01)。其培养的PBMCs的NF-κB核染色阳性百分率:LPS组比空白组极显著升高(27%±13%VS9%±2%,P<0.01);IL-10组比LPS组显著降低(16%±9%VS27%±13%,P<0.05)。通过相关分析发现:健康正常人培养的PBMCs的NF-κB核染色阳性百分率与IL-1β、TNF-a、IL-6呈显著正相关(相关系数r值分别为0.301、0.792、0.327,P值分别为<0.05、<0.01、<0.05);
结论:①心力衰竭患者NF-κB表达增高,细胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6)分泌增多。在心力衰竭患者,可能通过NF-κB表达的上调促进细胞因子(TNF-a、IL-1β、IL-6)的分泌。②IL-10可下调细胞因子的分泌以及降低NF-κB的活化,IL-10可能通过下调NF-κB活化来降低促炎性细胞因子的分泌。