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昆虫细胞培养对昆虫细胞-杆状病毒生物技术的应用以及对医学、农业、及生物学的各个领域的发展都起着重要作用。本文以鳞翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae）的棉铃虫（Helicoverpa armigera）卵为实验材料,建立了一个新的棉铃虫胚胎细胞系。本实验主要从棉铃虫胚胎细胞系的建立、培养、生物学特性以及昆虫细胞系利用等方面进行了研究。新棉铃虫胚胎细胞系的建立不但为离体条件下进行相关的分子生物学等实验研究提供了潜在材料,也为昆虫细胞系的培养等相关研究奠定了一定的基础。主要的研究结果如下:1.棉铃虫胚胎细胞系Ha168的建立使用含有10%的TNM-FH培养基对棉铃虫胚胎细胞体外培养,历时将近两年的培养,最终建立了一个生物学特性稳定且生长良好且可以稳定传代的细胞系,命名为Ha168。2.棉铃虫胚胎细胞系Ha168的鉴定（1）细胞形态特征:Ha168细胞系为贴壁生长型细胞,以圆形,梭形细胞为主,还有少量的巨型细胞,其中圆形细胞约占77%,大小为14.30±2.804μm,n=100;梭形细胞约占20%,大小为12.04±2.928×47.09±12.674μm,n=100。（2）细胞系来源的分子鉴定:对比Sf9细胞、棉铃虫卵与Ha168细胞系的细胞色素c氧化酶亚基I基因（COI）序列,结果表明:Ha168细胞与棉铃虫卵COI基因序列相似度为100%,与Sf9细胞的COI基因序列比对相似度仅为91%。DAF（DNAAmplification Fingerprinting）与RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）的扩增谱带中Ha168与棉铃虫卵较为相似,与Sf9明显不同。以上结果均表明Ha168细胞系来源于棉铃虫组织。（3）细胞增殖动力学特性:绘制了Ha168细胞系的增长曲线,算出Ha168细胞系25代时的群体倍增时间为56.8 h。（4）核型分析:通过对比发现0.7%KCL低渗溶液对观察Ha168细胞系效果最好,在1000倍光学显微镜下观察发现,棉铃虫胚胎细胞的染色体呈点状聚集于核区其结果呈正态分布,染色体数目分布区间为20210,平均为71条。（5）冻存与复苏特性:对在液氮中冻存了6个月的Ha168细胞系进行复苏,观察发现其可以正常贴壁生长,说明此细胞系可以在液氮中长期保存。（6）支原体检测:PCR检测Ha168细胞系,结果为无支原体污染。3.EGFP在Ha168细胞系中的表达水平研究（1）Ha168细胞系对AcMNPV-EGFP的敏感性:用重组病毒AcMNPV-EGFP感染Ha168细胞系,Sf9细胞系作为对照,使用有限稀释法,测定Ha168、Sf9细胞系对AcMNPV-EGFP的半数组织培养感染剂量(Median Tissue Culture Infectious Dose,TCID50),结果为:Ha168细胞系的病毒侵染速度比Sf9细胞系慢,Ha168细胞系的TCID50为10-2.78,Sf9细胞系的TCID50为10-6.1,说明重组病毒AcMNPV-EGFP对Ha168细胞系的敏感性小于Sf9细胞系。（2）EGFP在Ha168细胞系中的表达水平:Ha168细胞系的蛋白表达量约为Sf9的7/10。综上所述,我们用棉铃虫卵建立了棉铃虫细胞系,并对其进行基础生物学测定,病毒敏感性,以及对外源蛋白表达水平的测定,有进一步的研究价值。