芫根(Turnip)与青稞(Highland barley seedlings)在高原地区广泛种植。芫根取其根部,具有清热解毒、滋补增氧的功效,文献报道,芫根具有抗缺氧、抗氧化、降血糖等多种生物活性,现己开发有多种保健食品。青稞是高原地区的主要粮食作物之一,青稞苗为其抽穗前的嫩叶,报道称青稞苗具有抗氧化、抗衰老、增加免疫力等功效,但目前尚未如小麦苗一般开发为保健产品。迄今,也未见有系统研究两者质量控制的有关报道。本论文分析了芫根、青稞苗的物质基础,进行了质量标准控制方法的研究,主要内容包括:1文献研究论文对芫根及青稞苗的成分、分析方法、药理活性等的研究进展进行了综述,以期为实验的开展提供研究依据与理论支持。2色谱-质谱联用的成分分析2.1芫根成分分析(1)采用液相色谱串联高分辨二级质谱(LC-HRMS/MS)分析芫根成分,利用高分辨质谱得到精确质量数,根据碎片信息,推测了化合物,结果显示:0.9～1 min主要为小分子有机酸、己糖、己二糖和三糖等成分;1～10 min主要为氨基酸糖苷类物质;11～21 min主要为脂肪酸、脂肪酸衍生物及其糖苷类成分。(2)采用气相色谱串联质谱(GC-MS)分析芫根中有机酸成分,利用NIST 2014标准谱库,检索到了 22种有机酸成分,其中包含有17种一元酸约占总峰面积的77.46%,3种二元酸占4.47%,仅有柠檬酸1种多元酸约7.34%。归一化面积大于4%的有8种有机酸,分别为乙酰丙酸、丁二酸、柠檬酸、十六酸、亚麻酸、油酸、亚油酸、2,4-二烯庚酸。2.2青稞苗成分分析采用液相色谱串联高分辨二级质谱(LC-HRMS/MS)分析青稞苗中成分,利用高分辨质谱得到的精确质量数,根据碎片信息,推测化合物,结果显示:1～7 min主要为小分子有机酸、氨基酸、己二糖等成分;9～14 min主要为黄酮及其糖苷类化合物,15～26 min主要为脂肪酸及其衍生物。3质量分析方法研究参照现行版《中国药典》药材质量标准的条款,分别测定了芫根和青稞苗的水分、灰分、浸出物,研究建立了薄层鉴别方法和含量测定方法。3.1芫根质量分析方法(1)依据《中国药典》附录中的相关方法测定,结果显示:不同批次芫根的水分含量在2.7%～13.9%之间,总灰分在4.0%～6.9%之间,酸不溶性灰分在0.1%～0.2%之间,浸出物含量在49.0%～57.7%之间。(2)研究建立了芫根的薄层鉴别方法,实验结果显示:以硅胶G为薄层板,以正丁醇-水-冰乙酸(8:1:1)为展开剂,10%硫酸乙醇为显色剂,方法简便、专属性强。(3)采用柱前衍生化气相色谱法,建立了测定芫根中乙酰丙酸、丁二酸、十六酸、柠檬酸、亚麻酸、油酸、亚油酸含量的方法。方法学考察结果显示,符合含量测定要求。在0.02～3 g/L浓度范围内线性关系良好,各有机酸相关系数大于0.9995,回收率试验在97.27%～103.54%之间,方法准确、重复性好,具有可操作性。测定样品结果显示,不同批次芫根的有机酸含量差异较大。(4)采用硫酸-蒽酮法建立了芫根中总糖与多糖含量测定方法,方法学考察结果显示符合含量测定要求。以葡萄糖为对照品,在0.003～0.027 g/L浓度范围内,线性关系良好,相关系数为0.9996,回收率为98.38%(RSD=1.8%)。测定样品含量结果显示,芫根中总糖含量在3 1.6%～54.0%之间,多糖含量在0.6%～0.9%之间。(5)采用液相色谱法研究建立了芫根指纹图谱测定方法。以尿苷作为参照物,方法学考察显示符合指纹图谱方法建立要求。统计不同批次芫根的色谱图,结果显示存在7个共有指纹峰,以《2012年版中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件》统计显示,相似度大于0.9。由于样品批次较少,指纹图谱尚待完善。3.2青稞苗质量分析方法(1)依据《中国药典》附录中的相关方法测定,结果显示:不同批次青稞苗的水分在8.2%～8.7%之间,浸出物含量在36.7%～43.1%之间。(2)研究建立了青稞苗的薄层鉴别方法,实验结果显示:以硅胶G为薄层板,以乙酸乙酯-丙酮-冰乙酸(7:1:0.01)为展开剂,在365 nm波长下检视,方法简便、专属性强。(3)采用紫外-可见分光光度法,以1%三乙胺溶液为位移试剂,建立了青稞苗中总黄酮含量测定方法。经方法学考察符合含量测定要求,以芹菜素为对照,在0.002～0.01 g/L浓度范围内,线性关系良好,相关系数为0.9990,回收率为100.25%(RSD=1.8%)。方法简便、可靠,具有可操作性。测定不同批次样品,结果显示:以芹菜素(C15H10O5)计,各批次青稞苗的总黄酮含量在1.73%～1.93%之间。(4)采用液相色谱法,建立了测定青稞苗中皂草黄苷含量的方法。以Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸(30:70)为流动相,经方法学考察符合含量测定要求,在0.0496～0.496 g/L浓度范围内,线性关系良好,相关系数为1,回收率为102.15%(RSD=1.75%)。方法简便,具有可操作性。测定不同批次样品,结果显示:各批次青稞苗的皂草黄苷含量在0.8%～1.6%之间。(5)采用液相色谱法研究建立了青稞苗指纹图谱测定方法,以皂草黄苷作为参照物,方法学考察符合指纹图谱建立要求。统计不同批次青稞苗的测定结果,显示有13个共有指纹峰。以《2012年版中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件》统计显示,热杰、罗布、拉萨的青稞苗相似度大于0.93,但旦增地区的稞苗相似度小于0.9。由于样品批次较少,指纹图谱尚待完善。4活性初步研究4.1芫根活性初步研究采用体外实验ELLMAN法,考察了芫根的抗乙酰胆碱酯酶能力。结果显示不同批次芫根的能力有差异。采用DPPH法和羟基自由基清除法考察芫根的抗氧化能力,结果显示当芫根浓度达到1.6 g/L时,其自由基清除率均达到50%。4.2青稞苗活性初步研究采用DPPH法和羟基自由基清除法考察青稞苗抗氧化能力,并与小麦苗比较,结果显示,当青稞苗浓度达到0.4 g/L时,DPPH自由基清除率均能超过50%;除旦增青稞苗外,当浓度达到0.6 g/L时,羟基自由基清除率能达到50%。在相同浓度下,小麦苗的DPPH自由基清除能力高于青稞苗,但羟基自由基清除能力小于青稞苗。