免疫印迹(Immunoblot)又称蛋白质印迹(Western blot),是分离和识别复杂样品中特定蛋白的常用技术,分辨率和实用性能高,特异性强,灵敏度高,应用于蛋白的定性和半定量分析等。但该技术步骤繁琐,耗时长,有机荧光发色团荧光稳定性低,难以长时间成像。不同的发色团需要不同波长的光源激发,使成像复杂化,且不能同时检测多种蛋白。本文结合量子点技术,将连接有一抗或二抗的量子点作为优良的荧光成像剂应用于免疫印迹分析,光稳定性强,准确度、精密度均优于传统方法,能定性定量检测蛋白,不需要另加化学发光试剂,成像系统简单,步骤简单,有望成为蛋白定性定量分析的新手段。全文主要分为以下四个部分:第一章综述本章对三种类型量子点的制备方法进行简要综述,比较各种类型量子点的优劣势;介绍常用量子点偶联生物分子的技术及体系组成;最后简介了目前量子点在Western blot中的应用,在定量分析多组分蛋白中体现了优异的品性。第二章水溶性Cd Te量子点的制备及表征本章以碲粉、氯化镉为原料,采用水相制备法制备了水溶性Cd Te量子点,系统地研究了镉碲比、MPA的量、p H值、回流时间、反应温度等反应条件对Cd Te量子点生长速率和荧光强度的影响;采用荧光光谱、紫外光谱、琼脂糖电泳、激光粒度仪、高效液相色谱(HPLC)等多种表征技术对制备的Cd Te量子点进行表征评价,测定Cd Te量子点的荧光量子产率。确立制备Cd Te量子点的最佳反应条件为摩尔比Cd2+:HTe-=1:0.5:2,p H值为9,油浴温度为130℃。回流时间为3 h的条件下制备的Cd Te量子点荧光强度最强,荧光量子产率最高,尺寸较均一,大约10 nm。第三章Cd Te量子点-蛋白偶联物的制备及表征本章采用共价偶联的方法制备量子点-生物蛋白偶联物。巯基丙酸修饰的水溶性Cd Te量子点,利用EDC、NHS交联剂将量子点表面羧基与生物蛋白氨基偶联。确立偶联β-HCG单抗最优反应条件,弱碱性环境下,37℃下反应2-4 h可制备荧光强度高、稳定性好的Cd Te量子点-β-HCG单抗偶联物。采用荧光光谱、HPLC、琼脂糖电泳、激光粒度仪等对偶联物进行表征,结果显示,在最佳工艺条件下制备的量子点-蛋白偶联物荧光强度较高,稳定性好。第四章Cd Te量子点-蛋白偶联物在Western blot中的应用本章采用传统Western blot检测方法、量子点标记一抗检测法、量子点标记二抗检测法三种方法测定β-HCG,并进行方法学验证。结果表明传统方法的线性关系、精密度等误差较大,定量检测蛋白时难以提供准确数据。量子点标记一抗检测法结果在线性、精密度、回收率等方面优于传统方法。量子点标记二抗检测法经二抗放大荧光信号,灵敏度与传统方法相当,线性关系更好,结果稳定,精密度、回收率也优于传统方法,体现了良好的应用前景。