目的:热应激是我国南方地区最主要的应激致病因素之一,可导致动物免疫功能下降和炎性肠病的发生。但其致病机制尚不清楚,阻碍了防控措施的进一步开发。鉴于TLRs是重要的模式识别受体,阐述其介导信号通路的热应激响应,有望弄清热应激诱发动物免疫抑制的发生机理。方法:克隆猪TLR2、GM-CSF和IL-4基因,生物信息学方法对其结构和功能进行分析。构建猪p IRES2-EGFP-p GM-CSF和pIRES2-EGFP-p IL-4真核表达载体,分别转染猪IPEC-J2细胞,经G418筛选,获得能稳定表达猪GM-CSF和IL-4的IPEC-J2细胞系。以该细胞系的培养上清为诱导物,诱导分化猪骨髓细胞为树突状细胞（DC）。构建真核表达重组质粒pc DNA3.1/V5-HIS-p TLR2并分别共转染DC和IPEC-J2细胞,荧光定量检测其表达水平,荧光素酶活性分析NF-κB的活性变化。结果:生物学信息分析结果显示:猪TLR2基因编码785个氨基酸,分子量为89.6 k Da,PI为7.52。与牛、羊、人、狗和小鼠的同源性分别为80.2%、80.1%、77.9%、76.8%和68.0%。结构预测显示猪TLR2是跨膜蛋白,有O-糖基化位点和N-糖基化位点;猪GM-CSF基因编码144个氨基酸,分子量为16.3 k Da,等电点为7.15。与绵羊、马、猫、牛、狗和人的同源性分别为77.1%、73.6%、72.2%、71.5%、71.3%和70.8%。p IRES2-EGFP-p GM-CSF重组质粒转染IPEC-J2细胞24 h后,荧光定量PCR可见GM-CSF m RNA表达量较对照组及空载组细胞显著升高（P<0.01）,荧光显微镜下亦可见大量绿色荧光表达。经G418筛选和阳性细胞单克隆扩增后持续传代30次,仍可见GM-CSF在基因和蛋白水平的高表达,且较空载组提高200多倍;猪IL-4基因编码133个氨基酸,分子量为15.02k Da,PI为8.64。其与牛、羊、马、猫、狗和人的同源性分别为80.5%、76.7%、72.7%、72.9%、72.0%和69.2%,而与小鼠的同源性仅为41.5%。构建出重组质粒p IRES2-EGFP-p IL-4并将其转入猪肠上皮细胞（IPEC-J2）后,经G418阳性筛选,获得稳定表达猪IL-4的细胞系。该重组质粒转染IPEC-J2细胞24 h后,荧光定量PCR可见IL-4 m RNA的表达量较对照组及空载组极显著升高（P<0.01）,荧光显微镜下亦可见大量绿色荧光表达。该细胞系在连续传代28次以后,亦见IL-4在基因和蛋白水平的高表达。经GM-CSF和IL-4稳传细胞培养上清诱导分化了猪骨髓源DC。构建出重组质粒pc DNA3.1/V5-HIS-TLR2,转染IPEC-J2和DC,检测到TLR2和HSP70 m RNA在细胞中高效表达,荧光素酶活性检测发现TLR2可与HSP70协同上调NF-κB活性。结论:（1）成功克隆了猪TLR2、GM-CSF和IL-4基因。（2）成功构建了真核表达载体p IRES2-EGFP-p GM-CSF和p IRES2-EGFP-p IL-4,转染IPEC-J2后,筛选出了能分别表达猪GM-CSF和IL-4的两株稳传细胞系。（3）成功诱导分化了猪骨髓源DC。（4）TLR2能与HSP70协同上调NF-κB活性。