【摘 要】
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目的:研究荔枝核总黄酮（TFL）对体外由转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导活化的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）中NF-κB核转位及相关蛋白表达的影响,探究该药抗肝纤维化的作用机制。方法:体外培养HSC-T6,通过TGF-β1诱导24h后以125ug/ml、250ug/ml及500ug/ml的TFL干预48h,采用激光共聚焦显微镜观察TFL对HSC-T6内NF-κB核转位的影响,并以wester
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目的:研究荔枝核总黄酮（TFL）对体外由转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导活化的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）中NF-κB核转位及相关蛋白表达的影响,探究该药抗肝纤维化的作用机制。方法:体外培养HSC-T6,通过TGF-β1诱导24h后以125ug/ml、250ug/ml及500ug/ml的TFL干预48h,采用激光共聚焦显微镜观察TFL对HSC-T6内NF-κB核转位的影响,并以western blot法检测TFL对细胞内TLR4、p-NF-κB、Bcl-2、Bax及CollagenⅠ蛋白表达水平的影响,免疫荧光法检测TLR4、p-NF-κB的表达。结果:（1）激光共聚焦显微镜下可见TFL抑制活化HSC-T6内NF-κB的核转位,并具有浓度依赖性。（2）免疫荧光法检测见实验对照组的TLR4荧光信号最强,即TLR4的表达相对于正常对照组明显增多,不同浓度的TFL作用后,随着TFL浓度的增大,TLR4信号逐渐减弱。而实验对照组中p-NF-κB的绿色荧光信号主要定位于细胞核,胞质少见或未见,经各浓度TFL作用后,细胞核内的绿色荧光信号信号逐渐减弱,并呈浓度依赖性。（3）Western-blot法见实验对照组HSC-T6细胞中TLR4蛋白（0.88±0.054）、p-NF-κB蛋白（0.79±0.026）、Bcl-2蛋白（0.90±0.035）、Bax（0.28±0.030）、CollagenⅠ蛋白（0.82±0.040）表达量与正常组HSC-T6细胞中TLR4蛋白（0.73±0.031）、p-NF-κB蛋白（0.65±0.028）、Bcl-2蛋白（0.72±0.058）、Bax（0.41±0.025）、CollagenⅠ蛋白（0.70±0.022）表达量相比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;TFL低浓度组HSC-T6细胞中TLR4蛋白（0.78±0.037）、p-NF-κB蛋白（0.66±0.0285）、Bcl-2蛋白（0.75±0.043）、Bax（0.44±0.025）、CollagenⅠ蛋白（0.70±0.047）、TFL中浓度组HSC-T6细胞TLR4蛋白（0.63±0.020）、p-NF-κB蛋白（0.52±0.029）、Bcl-2蛋白（0.6±0.048）、Bax（0.59±0.039）、CollagenⅠ蛋白（0.58±0.018）表达量及TFL高浓度组组HSC-T6细胞TLR4蛋白（0.45±0.051）、p-NF-κB蛋白（0.28±0.036）、Bcl-2蛋白（0.48±0.037）、Bax（0.73±0.023）、CollagenⅠ蛋白（0.36±0.111）表达量分别与实验对照组的TLR4、p-NF-κB、Bcl-2、Bax及CollagenⅠ表达量相比较差异有统计学意义（P<0.05）。即TFL可下调HSC-T6中TLR4、p-NF-κB、Bcl-2及CollagenⅠ的表达水平,而Bax的表达增加,同时具有浓度依赖性。结论:1.TFL抗肝纤维化机制可能与其抑制活化HSC-T6内NF-κB的核转位相关;2.TFL下调HSC-T6中TLR4、p-NF-κB、Bcl-2及CollagenⅠ的表达,上调Bax的表达水平,其可能是TFL干预肝纤维化进展的机制之一;3.TFL下调HSC-T6中TLR4、Bcl-2及CollagenⅠ的表达,上调Bax的表达水平,可能与抑制活化HSC-T6内NF-κB的活性相关。
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