原纤毛为来源于细胞基体并突出于细胞表面的细胞器,可感知周围的信号变化,并参与调控Hedgehog、PDGFR及Wnt等信号通路。原纤毛结构和功能异常与肿瘤发生发展密切相关。NEK-1和NEK-8参与调控原纤毛分解,但相关机制尚待阐明;且NEK-1和NEK-8自身表达及活性调控机制仍有待于进一步研究。本研究课题结果显示希佩尔-林道（Von Hippel-Lindau,VHL）缺失的肾癌细胞786-0、769-P和A498中NEK1与NEK8转录及蛋白表达水平均较高,而野生型VHL表达的Caki-1、ACHN细胞中NEK1与NEK8的表达水平较低;通过质粒转染上调VHL蛋白水平或siRNA转染介导VHL蛋白表达降低,可分别降低或升高肾癌细胞中NEK1与NEK8蛋白水平,证实VHL参与调控NEK1与NEK8的可能性。鉴于HIF为最主要的VHL下游靶蛋白,我们进一步分析了 NEK1与NEK8基因序列并发现其非编码区含有多个缺氧反应元件（HRE,5’-RCGTG-3’,R=A/G）。实验围绕可能的HER位点构建了一系列突变体,进行Ch-IP检测。结果显示,NEK1基因序列-41～-37片段和NEK8基因序列中-643～-639片段为有效的HRE结构域。提示NEK1与NE1K8可能为新的缺氧应答基因。同时,二氯化钴或1%氧气环境复制缺氧模型可诱导肾癌Caki-1细胞NEK1与NEK8表达上调;以及HIFα脯氨酰羟化酶（HIF-PH）抑制剂DMOG预处理也可上调NEK1与NEK8表达。此外,HIF-2α siRNA可拮抗缺氧诱导的NEK1蛋白表达上调,而siRNA介导的HIF-1α或HIF-2α蛋白水平下调均可阻止缺氧诱导的NEK8蛋白表达上调,证实NEK1与NEK8为HIF的下游靶基因。除HIF外,VHL作为E3泛素连接酶的新目标靶蛋白的发现亦备受关注。本课题研究也证实肾癌细胞中VHL与NEK1或NEK8可不依赖于HIFs直接相互结合,并发现VHL促进NEK1与NEK8蛋白泛素化水平而促进其经蛋白酶体途径降解。与文献报道一致,我们的结果也显示仅在野生型VHL表达的肾癌细胞（如Caki-1细胞）中可检测到原纤毛结构,而VHL缺失的肾癌细胞（如786-0细胞）原纤毛结构丢失;下调VHL可减少野生型VHL的Caki-1细胞的原纤毛数量。但是,siRNA介导的NEK1或NEK8蛋白水平下调可阻止VHL-siRNA诱导的原纤毛结构分解,提示NEK1和NEK8参与VHL维持原纤毛结构稳定的过程。综上所述,VHL可通过HIF依赖和非依赖两种方式参与NEK1和NEK8基因表达及蛋白降解调控,进而维持肾癌细胞原纤毛结构的稳定。