鼠的小肠分泌胰岛素的研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:jiangxueying0518
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目的:明确小肠内胰岛素的存在情况及其表达水平并利用小动物成像技术来证明小肠分泌胰岛素。方法:8周龄的雄性Wister大鼠78只,实验前禁食24h,分别灌胃牛血清白蛋白溶液、油脂悬液、50%葡萄糖溶液各2mL,每组分别于灌胃后在第Omin、5min、10min、15min、20min、25min时脱臼处死,按不同的时间段分为6个组,分别取大鼠的十二指肠、胰腺组织。提取各组织中的总的RNA,在反转录成cDNA,然后再用普通的PCR凝胶电泳检测胰岛素mRNA的存在的情况,并实时荧光定量PCR检测不同的时刻十二指肠和胰腺胰岛素mRNA的相对的表达量。利用小动物成像来进一步证明小肠分泌胰岛素。用Cy7NHS来标记抗鼠的胰岛素抗体。经小鼠的尾静脉注入小鼠体内然后将小鼠放在Kodak in Vivo Imaging System进行荧光成像,激发波长720nm,发射波长790nm,软件进行分析。利用活体动物成像系统观察Cy7标记的抗小鼠的胰岛素抗体在小鼠体内的分布和代谢规律。结果:普通的PCR在小鼠的十二指肠中扩增出了胰岛素的基因片段;胰腺与十二指肠胰岛素mRNA的相对表达量有着显著的差异(P<0.05),胰腺胰岛素分泌远远高于十二指肠组织。灌胃后十二指肠和胰腺分泌胰岛素的表达水平呈动态表化,且胰腺分泌胰岛素的表达高峰早于十二指肠。小动物成像观察到了小肠处的荧光信号高于除胰腺的其它的组织中。结论:1.本实验证实了十二指肠组织具有分泌胰岛素的功能,并且在给大鼠灌胃后十二指肠胰岛素mRNA的相对表达量呈动态表化。2.活体成像技术实时监测到了鼠体内有胰岛素的分泌。从而推测糖尿病的一种可能发病机制
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