菠萝皮黄酮类化合物的结构分析及其生理活性研究

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菠萝皮渣是菠萝加工产生的副产物,如果不加以处理,将会对环境造成一定污染,也会对资源造成浪费。本研究对充分利用广东省的菠萝皮渣废弃物资源,提高其利用率,加快广东省建立现代化的菠萝高值化深加工综合利用产业有一定的贡献。从菠萝皮渣提取纯化黄酮类化合物后,利用各种途径进行其结构研究,进行菠萝皮黄酮类化合物体外抗氧化能力的研究,对三种不同的肿瘤细胞的抑制作用的研究,为寻找新的抗肿瘤食品提供理论基础。1、通过测定,新鲜菠萝皮中水分含量达到86.40%,菠萝皮总灰分、蛋白质、粗纤维含量分别为3.15%、3.75%、24.75%,菠萝皮干粉中Ca、Mg的含量相对较高,Ca元素含量达到126.20mg/100g,Mg元素含量为56.35mg/100g,而Zn和Cu元素含量分别为981.90ug/100g和492.10ug/100g。芦丁标准工作曲线的标准方程:Y=0.0072X+0.0038,相关系数R2=0.9995(R2>0.95)。采用热回流提取法、纤维素酶提取法和超声波辅助提取法进行提取,进行单因素正交试验,在最佳工艺条件下,乙醇热回流提取法提取含量为1.93%、纤维素酶-乙醇提取法提取含量2.16%、超声波萃取试验法提取含量2.13%。综合以上以上方法,菠萝皮黄酮类化合物的平均含量为2.07%。依照纯度计算方法测得菠萝皮黄酮类化合物粗品的纯度为10.74%。利用大孔树脂对菠萝皮黄酮类化合物粗品进行纯化,测得菠萝皮化合物纯品的纯度为35.65%。菠萝皮黄酮类化合物样品经过硅胶柱层析后大体可分成3种组分GF1、GF2、GF3,极性依次增高,其纯度分别为43.98%、65.70%及52.46%。2、综合所得的显色反应和荧光反应鉴别结果,可以发现菠萝皮黄酮类化合物提取液中含有的黄酮类物质的种类主要为黄酮、黄酮醇和双氢黄酮;比较菠萝皮黄酮类化合物各组分的红外光谱后主要发现,菠萝皮黄酮类化合物结构中可能含有硫酸基和β-糖苷键,可推断出菠萝皮黄酮类化合物以糖苷类形式成在;从菠萝皮黄酮类化合物的紫外分析得到,结构中含有5-OH,无3-OH。从而该化合物结构可能为5,7-二羟基黄酮,进一步证明菠萝皮黄酮类化合物以糖苷类形式成在。根据质谱图分析可知,有少量分子量为611.53的物质,该物质很可能为三水芸香叶苷;另外槲皮素-3-0-新橙皮素,相对分子质量为610.52,在质谱检测中峰值很可能表现为611.52[M+H]+;质谱特性m/z在627(M+1),465,303时为黄酮二糖苷,所以菠萝皮黄酮类化合物中含有黄酮二糖苷,极有可能为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷,而且303.43的分子离子峰是该质谱图中峰度最高的峰,由红外图谱和紫外图谱结论可以推测到,该黄酮分子的苷元相对分子质量为302.43,而榭皮素的相对分子质量为302.1,因此可以初步认为该黄酮分子的苷元为榭皮素;所以菠萝皮黄酮类化合物可能含有三水芸香叶苷或者槲皮素-3-0-新橙皮素。该分子离子峰由[M+H]+m/z498.17到m/z322.05丢失的分子量为186,比一个葡萄糖基的相对分子质量162大14,从而可以推测该菠萝皮黄酮类化合物分子甙元连接一个葡萄糖单糖分子和一个m/z14的基团,根据相对分子质量的大小推断,该基团可能为-CH2-,m/z322.05可能为[M+H]+m/z498.17失去一个葡糖糖基(m/z162)和一个次甲基(m/z14)而形成的基峰。m/z322.05通过失去分子量为17的基团后形成m/z305.05的离子峰,相对分子量为17的基团可能为羟基(-OH),由此可以推测该菠萝皮黄酮类化合物分子可能含有一个葡萄糖配基和一个酚羟基结构。3、研究出DPPH·标准曲线为CDPPH=4.7326×A516+1.5144×10-2,DPPH·清除率=1-CDPPH/C0×100%。不同成分对清除DPPH·自由基作用持续时间从长到短的大小关系为:硅胶柱组分GF2>硅胶柱组分GF1>硅胶柱组分GF3>黄酮纯品>芸香叶苷>黄酮粗品和维生素C。不同成分对DPPH·自由基清除作用呈现较明显的差异,清除率大小顺序依次为:硅胶柱GF2组分>硅胶柱GF1组分>黄酮纯品>芸香叶苷>硅胶柱GF3组分>黄酮粗品>Vc。对超氧阴离子自由基(·O2-)清除率大小顺序依次为:GF2>GF1>黄酮纯品>芸香叶苷>黄酮粗品>GF3>Vc。测定以上几种不同成分的总抗氧化能力,在30ug/mL时,总抗氧化能力依次为:硅胶柱GF2>硅胶柱GF1>黄酮纯品>硅胶柱GF3>黄酮粗品>芸香叶苷>Vc。4、芸香叶苷和Vc对人肺癌细胞A549的抑制作用比较明显,随着其浓度的增大,对人肺癌细胞A549的抑制率越大,且在浓度为240ug/mL时,抑制率分别达到58.60%和63.00%;而菠萝皮黄酮类化合物随着浓度的增大,对人肺癌细胞A549的抑制作用没有呈现线性正相关:在浓度120ug/mL以下,随着浓度的增加,菠萝皮黄酮类化合物粗品、纯品以及硅胶柱GF1、GF2、GF3组分对人肺癌细胞A549的抑制率都呈增加效果,然而,它们在浓度为240ug/mL时,对人肺癌细胞A549的抑制效果反而出现下降趋势。这说明菠萝皮黄酮类化合物对对人肺癌细胞A549的抑制效果,并不是随着浓度的增加而显现抑制率越强的关系。对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率大小顺序依次为:芸香叶苷>GF2>GF1>黄酮纯品>GF3>黄酮粗品>Vc,在浓度为240ug/mL时,对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率依次为53.10%、49.90%、37.10%、36.70%、30.80%、28.60%和5.20%;对小鼠肉瘤细胞S-180的抑制率大小顺序依次为:芸香叶苷>GF3>黄酮纯品>黄酮粗品>GF1>GF2,在浓度为240ug/mL时,对小鼠肉瘤细胞S-180的抑制率依次为:70.80%、60.50%、58.70%、46.50%、42.50%和32.10%,同时浓度为240ug/mL的Vc对小鼠肉瘤细胞S-180的抑制率为45.80%。
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