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目的:通过大鼠去势、牙周结扎建立骨质疏松牙周炎动物模型,观察左归丸对实验性骨质疏松大鼠牙周炎及骨代谢的影响,探讨左归丸对实验性骨质疏松大鼠抑制牙槽骨吸收和促进新骨生成的作用,为临床中药防治绝经后骨质疏松牙周炎患者提供实验参考。
方法:选用纯种6月龄雌性未生育SD大鼠58只,随机分为5组:正常组、假手术牙周炎组、去势牙周炎组、去势牙周炎雌激素治疗组(简称雌激素组)、去势牙周炎左归丸治疗组(简称左归丸组),其中正常组10只,其余每组12只。去势牙周炎组、雌激素组、左归丸组大鼠切除双侧卵巢,假手术牙周炎组仅切除卵巢附近的脂肪组织;去势术后4周,假手术牙周炎组、去势牙周炎组、雌激素组、左归丸组大鼠用直径0.2mm的钢丝结扎双侧上颌第一磨牙牙颈部;卵巢切除术后3个月(牙周结扎术后2个月),骨质疏松模型鉴定成功后,雌激素组大鼠用戊酸雌二醇,按0.5mg/kg体重的比例用生理盐水配成悬浊液,1ml每日灌胃;左归丸组大鼠用左归丸,按5g原生药材/kg体重的比例用生理盐水配成溶液,每只大鼠每日取1ml灌胃;其余三组每日灌胃1ml生理盐水水;服药3个月后,股动脉放血处死大鼠,留取全血,酶动力学法检测血清中的检测血清中的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP),偶氮胂Ⅲ比色法检测血清中的钙(Ca)、紫外比色法检测血清中的磷(P);取大鼠上颌骨,左半侧上颌骨立即放入10%甲醛缓冲溶液中固定,然后经10%EDTA溶液脱钙,制作牙周组织切片,进行HE染色,光镜观察组织形态学变化;右半侧上颌骨取下后,取上颌第一磨牙的牙周组织及牙槽骨研钵研碎,匀浆机打成匀浆,离心后取上清,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)、破骨细胞核因子KB受体活化因子配体(RANKL)水平,并作统计学分析处理。
结果:⑴大鼠卵巢切除术后3个月,去势组比其他组饮食增加,体重增加较快(P<0.05),随机抽取去势组及正常组大鼠,处死,取大鼠股骨,制作股骨组织切片,正常组股骨骨小梁粗大、密集,顺受力方向规则排列;去势组股骨骨小梁较细小、稀疏,排列紊乱,不规则。说明去势法已成功建立骨质疏松动物模型。⑵牙周结扎术后4周,随机抽取牙周炎大鼠,处死,取上颌骨,左半侧制作上颌第一磨牙牙体牙周联合切片,组织学观察,牙龈炎症明显,牙周膜内血管扩张结合上皮结合不紧密,或已向根方增殖。说明牙周结扎已成功建立牙周炎动物模型。⑶大鼠牙周HE染色组织形态学观察,正常组:结合上皮位于釉牙骨质界处,牙龈牙周膜纤维排列整齐,牙槽嵴顶无吸收。假手术牙周炎组:牙龈上皮内有炎细胞浸润,结合上皮向根方增殖,形成较深的牙周袋,沟内上皮下方及固有层炎细胞少,血管扩张充血,牙槽嵴顶降低、吸收,未见明显破骨细胞。去势牙周炎组:形成深的牙周袋,有的深达根尖1/3,有的累及根分叉,沟内上皮下方及固有层有大量炎细胞浸润,血管扩张充血,暴露牙骨质和牙槽嵴表面有大量吸收陷窝,破骨细胞多,成骨细胞少。雌激素组:牙周袋存在,沟内上皮下方及固有层有少量炎细胞浸润,牙槽嵴及牙骨质吸收陷窝边缘可见成骨细胞,牙槽骨可见有新骨形成。左归丸组:牙周袋浅,沟内上皮下方及固有层有少量炎细胞浸润,牙槽嵴及牙骨质吸收陷窝边缘可见较多成骨细胞,牙槽骨可见有较多新骨形成。⑷ELISA测定大鼠牙周组织中OPG、RANKL水平结果,大鼠牙周组织中的OPG含量去势牙周炎组明显高于正常组和假手术牙周炎组(P<0.01),左归丸组和雌激素组明显高于去势牙周炎组(P<0.01),雌激素组和左归丸组无明显差异(P>0.05)。大鼠牙周组织中的RANKL含量去势牙周炎组明显高于正常组和假手术牙周炎组(P<0.01),左归丸组和雌激素组明显低于去势牙周炎组(P<0.01),雌激素组和左归丸组无明显差异(P>0.05)。⑸大鼠血清中的ALP、Ca、P,血清中的ALP,去势牙周炎组明显高于正常组和假手术牙周炎组(P<0.01),左归丸组和雌激素组明显低于去势牙周炎组(P<0.01),雌激素组和左归丸组无明显差异(P>0.05)。血清中的Ca,去势牙周炎组明显低于正常组和假手术牙周炎组(P<0.01),左归丸组和雌激素组明显高于去势牙周炎组(P<0.01),雌激素组和左归丸组无明显差异(P>0.05)。血清中的P,去势牙周炎组明显高于正常组和假手术牙周炎组(P<0.01),左归丸组和雌激素组明显低于去势牙周炎组(P<0.01),雌激素组和左归丸组无明显差异(P>0.05)。
结论:①切除大鼠双侧卵巢和钢丝结扎法结扎上颌第一磨牙成功建立了大鼠骨质疏松牙周炎模型。②相同刺激因素下,骨质疏松可加重牙周病变。③左归丸显著降低了牙周组织中RANKL,使牙周组织中的OPG明显升高,对骨质疏松性牙周炎有明显的治疗作用。④左归丸通过降低血清中骨代谢局部调节因子ALP,升高血清中的Ca,降低血清中的P,促使颌骨骨量增加,改善了牙槽骨结构。⑤左归丸具有类雌激素样作用。