木榄质膜Na~+/H~+逆转运蛋白BgSOS1的调控机理研究

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土壤盐渍化是一个主要限制农作物生产率的条件,因为这不仅减少了农作物的生产量,也限制了未经耕作的土地上农业的发展。植物能够利用Na+/H+逆向转运蛋白介导的Na+的外排和Na+的区隔化来维持细胞溶质中较低的Na+浓度。位于质膜上的Na+/H+逆转运蛋白SOS1(salt overly sensitive1)可以把细胞质中过多的Na+排出细胞,降低Na+的毒害作用。木榄是一种红树植物,具有很强的耐盐能力,因此是研究耐盐的极好材料。本研究在前人的基础上,将BgSOS1和BgSOS1突变基因BgSOS1-DAPA以及BgSOS1-3000分别转入酵母突变体AXT3K中,通过对耐盐性的分析,进一步探究木榄质膜上的Na+/H+逆转运蛋白BgSOS1的调控机理。主要研究结果如下:(1)利用PCR的方法获得Ser1 143和Ser1 145双突变的BgSOS1突变基因BgSOS1-DAPA,并构建了酵母表达载体。通过对BgSOS1可能的自身功能抑制区域进行缺失突变,得到了突变基因BgSOS1-3000,并构建了酵母表达载体。借助于酵母突变体AXT3K进行酵母功能互补实验表明,BgSOS1、BgSOS1-DAPA都受到单独的AtSOS2或者AtSOS2/AtSOS3(AtCBL4)复合体的调控,此外发现,单个BgSOS1-3000转酵母在高盐浓度下也生长得很好,说明其具有很高的耐盐性。(2)通过研究CBL家族中其它成员与SOS2互作后对BgSOS1的调控作用,发现除了 SOS3(CBL4)蛋白外,还有CBL5,CBL8,CBL9,CBL10与SOS2互作后可以调控BgSOS1。之后选取了 CBL10研究其与SOS2互作后对BgSOS1-DAPA和BgSOS1-3000的调控作用,发现仍能够调控BgSOS1-DAPA。(3)为了研究其他CIPK蛋白对BgSOS1功能的调控分析,我们选取了 CIPK家族的12个成员,通过转化酵母盐敏感突变体菌株AXT3K,发现只有CIPK24(SOS2)能够调控 BgSOS1。
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