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背景与目的:肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,简称KPN)是导致医院内感染的常见病原菌,可引起呼吸道、消化道和泌尿系统感染。根据2013年中国CHINET细菌耐药性监测报道,在肠杆菌科细菌中克雷伯菌属耐药性较上年有所增多,且在对碳青霉烯类耐药株中,以肺炎克雷伯菌为最多,其对亚胺培南和美洛培南的耐药率均>10.0%。KPN容易产生生物膜(biofilm,BF),将细菌层层包裹,增加该菌对抗菌药物的耐受性。随着对生物被膜研究的深入,发现KPN对抗生素的耐药性与生物膜形成密切有关。生物膜的主要组成物质是多糖蛋白复合物,国内外研究表明,喹诺酮类药物与大环内酯类药物联合使用可以有效抑制细菌合成多糖蛋白复合物,从而抑制生物膜的形成。绿原酸(Chlorogenic acid,简称CA)是中药有效成分,由金银花等中草药提取。有资料显示绿原酸可以抑制铜绿假单胞菌的生物膜形成,但绿原酸对同样容易产生生物膜的KPN抑制作用如何则鲜有报道。本研究拟先对某医院肺炎克雷伯菌临床分布及耐药情况进行分析,同时检测形成BF肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型,再通过体外实验,探讨绿原酸对KPN生物膜的影响及与左氧氟沙星(LEV)联合对KPN的作用。为临床制定合理科学的抗菌治疗策略提供依据。方法:收集广州某三甲医院临床分离肺炎克雷伯菌62株,进行鉴定及药敏分析,采用半定量结晶紫染色法进行生物膜阳性菌株筛选,同时采用PCR法对这类菌株进行ESBLs基因型检测、并构建生物膜模型及进行药物干扰研究。结果:共分离鉴定出62株肺炎克雷伯菌株,其中33株菌生物膜检测阳性,占53.2%(33/62)。产BF菌株中检出超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株24株,这24株ESBLs阳性菌株中SHV基因型的占54.17%(13/24),TEM基因型占41.67%(10/24),有4株同时存在SHV和TEM基因,未检测出CTX-M基因。经体外建模及药物干扰,单独药物组显微镜下黑色絮状物(代表致密生物膜)所占比例小于25%,而绿原酸和左氧氟沙星联合药物组显微镜下黑色絮状物所占比例小于15%,未处理组黑色絮状物所占比例为60%左右。结论:1.产生生物膜肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型以TEM基因型和SHV基因型为主。2.绿原酸具有抑制肺炎克雷伯菌生物膜作用,与左氧氟沙星联合,作用效果更显著。