低浓度MNNG诱导GES-1细胞过程中Shh信号通路的动态观察

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目的:探讨低浓度MNNG(N–甲基–N’–硝基–N–亚硝基胍)诱导GES-1细胞(人永生化胃黏膜上皮细胞)转化为MC细胞(转化细胞)过程中Shh信号通路的表达。方法:取预先冻存的GES-1细胞,复苏,传代,待细胞达80%融合时,细胞计数后,放入6mm培养皿中。取配制好的0.01mol/L的MNNG储存液,加入生长旺盛的GES-1细胞中,终浓度为2×10-5mol/L,避光培养24h后,更换不含MNNG的培养液。分别收集GES-1细胞(对照组,未加MNNG),0天(刚更换不含MNNG的培养基),3天,7天的MC细胞(标记为MC0、MC3、MC7)。RT-PCR分别检测ShhmRNA与Gli-1mRNA在GES-1、MC0、MC3、MC7的表达,RT-PCR产物行琼脂糖凝胶电泳,数字成像系统拍照分析,不同组比较采用Shh、Gli-1/GAPDH相对强度比值,试验重复3次。免疫细胞化学法分别检测Shh与Gli-1蛋白在GES-1、MC0、MC3、MC7的表达,用Image-proplus5.0图像分析系统对结果进行灰度分析。结果:RT-PCR结果显示ShhmRNA在GES-1细胞中阴性表达,在MC0、MC3、MC7细胞中表达阳性,并呈现逐渐增强的趋势,Gli-1mRNA在GES-1细胞中呈阴性表达,在MC0、MC3、MC7细胞中表达阳性,表达也逐渐增强;免疫细胞化学结果显示Shh蛋白在GES-1细胞中不着色(阴性表达),在MC0、MC3、MC7细胞中着色逐渐加深;Gli-1蛋白在GES-1细胞中也不着色(阴性表达),在MC0、MC3、MC7细胞中着色逐渐加深。结论:Shh信号通路参与了低浓度MNNG诱导GES-1细胞转化为MC细胞的过程,并随时间表达逐渐增强。
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