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无论发达国家还是发展中国家都面临着宫内生长受限(IUGR或FGR)的困扰。IUGR被美国妇产科学院誉为“现代妇产科中最为常见和复杂的疾病”。大约10%的妊娠女性会出现胎儿生长受损。IUGR胎盘功能不良,母体和胎儿之间气体、营养交换异常,胎儿为适应宫内缺氧、酸中毒、低血糖、低胰岛素血症及生长因子和氨基酸下降等环境的变化进行了一系列适应性改变。IUGR诸多不良并发症中,神经系统发育异常严重影响子代的生活质量及个人潜能的发挥,也因此备受关注。前额叶和海马是与学习记忆、空间认知等脑高级功能密切相关的区域,对缺氧变化较为敏感。NR1、NR2A、NR2B、KIF17和PSD95是与学习记忆功能密切相关的受体/蛋白,它们在IUGR大鼠大脑前额叶和海马中的表达变化以及补肾益气活血方的影响尚不明确。妊娠大鼠双侧子宫动脉结扎导致子宫胎盘供血不足,模拟了人类IUGR的病理变化。补肾益气活血方是前期发掘的一个中药药方,能增加子宫血流灌注,改善胎儿宫内缺血缺氧疗效显著。本研究中,我们采用结扎大鼠双侧子宫动脉建立IUGR动物模型,观察IUGR大鼠出生后30d大脑前额叶及海马组织中NR1、NR2A、NR2B、KIF17和PSD95的表达及补肾益气活血方的影响,以探讨该方防治IUGR的机制,为临床治疗提供依据。 实验一 IUGR大鼠出生后30天大脑前额叶和海马NR1、NR2A、NR2B、KIF17和PSD95的表达。 目的: 研究NR1、NR2A、NR2B、KIF17和PSD95在出生后30d的IUGR大鼠的大脑前额叶和海马中基因及蛋白的表达。 方法: 选取体重在280-300g的成熟无交配史的Wista大鼠27只,雌、雄按3:1比例随机合笼,以次日晨阴道涂片发现精子定为妊娠第0天。按受孕顺序随机分为2组,IUGR(I组)和假手术(C组),各组均于大鼠妊娠18天进行手术,IUGR组孕鼠双侧子宫动脉结扎,假手术组开腹但不结扎。两组手术结束后关腹等待孕鼠自然生产,待各组大鼠生后30天断头取脑,采用Real-time PCR和Western blot方法检测mRNA和蛋白的相对表达量。 结果: IUGR大鼠前额叶及海马NR1、KIF17及NR2B的基因及蛋白表达量降低,NR2A及PSD95的基因及蛋白表达量升高(IUGR雌鼠的PSD95略降低)。IUGR脑损伤中海马比前额叶更容易受损,且表现出一定的性别差异,IUGR的雄性后代受到的影响更加明显。 结论: IUGR大鼠前额叶及海马NR1、NR2A、NR2B、KIF17和PSD95的变化,可能是造成IUGR大鼠学习记忆及空间认知能力下降的原因。 实验二 补肾益气活血方对出生后30d的IUGR大鼠前额叶及海马组织NR1、NR2A、NR2B、KIF17和PSD95的影响 目的: 研究补肾益气活血方对出生后30天的IUGR雄鼠前额叶及海马组织的NR1、NR2A、NR2B、KIF17和PSD95的影响。 方法: 在实验一的基础上添加BSYQ组(B组),I组及C组按实验一的方法进行实验。BSYQ组于妊娠第18天结扎孕鼠双侧子宫动脉,且于妊娠第15天开始灌胃直至自然生产。各组自然生产后于雄鼠出生后30天断头取脑,采用Real-time PCR和Western blot检测mRNA和蛋白的相对表达量。 结果: 补肾益气活血方对宫内生长受限的大鼠的海马和前额叶的NMDA受体、KIF17和PSD95表达量的变化情况具有一定的改善,对宫内生长受限患儿的神经发育异常具有一定的治疗作用。