志贺菌是人类和畜禽感染细菌性腹泻的病原体之一。随着对志贺菌的研究深入,国内外许多报道表明,志贺菌除感染猪、鸡、鸭等畜禽外,仍可感染猴、狐狸等动物,并可引起严重的腹泻甚至死亡。鸡志贺菌病作为一种新发的传染性疾病,可引起鸡的血便、腹泻痢疾,严重的引起死亡,耐受的鸡生长迟缓和消瘦,给鸡养殖业造成严重的经济损失。鸡志贺菌病不仅可在家禽中相互传染,也可能在人禽间交叉感染,这就对人类公共卫生安全造成巨大的隐患。到目前为止,鸡源志贺菌的感染机制缺少足够的认识和了解,影响了此病的防控,因此更加深入的了解鸡源志贺菌的感染机制迫在眉睫。本研究采用细胞融合技术制备了针对IpaC蛋白单克隆抗体,使用铺覆蛋白印迹技术初步测定鸡肠上皮细胞受体分子量大小,为该蛋白的检测和该蛋白与鸡肠上皮细胞之间的相互作用做了铺垫,同时也为评估鸡源志贺菌在公共卫生方面的重要性提供了参考依据。研究结果如下:1.鸡源志贺菌IpaC基因的原核表达及IpaC蛋白纯化本研究通过对河南农业大学微生物实验室提供的pET32a-IpaC/BL21(DE3)的表达菌扩大培养,诱导表达,镍柱亲和纯化,获得了具有一定纯度的IpaC蛋白。经过SDS-PAGE和Western-blot鉴定,证明了纯化过的IpaC蛋白是由pET32a-IpaC/BL21(DE3)的表达菌中的IpaC基因转录翻译的蛋白。2.IpaC蛋白免疫原的制备及免疫本研究透析纯化的IpaC蛋白,再与弗氏佐剂等比例混合后乳化,制备了免疫原。通过免疫6-8周龄SPF级小鼠,获得了IpaC蛋白多克隆抗体,也为下步与SP2/0骨髓瘤细胞提供了实验材料。研究经过间接和间接竞争ELISA检测,证明了制备的IpaC抗原免疫原具有良好的免疫原性。3.IpaC蛋白的单克隆抗体的制备本研究是在能对IpaC蛋白产生良好免疫刺激的Balb/C小鼠基础上,进行细胞融合,阳性杂交瘤细胞的筛选,腹水制备,腹水纯化获得了具有针对IpaC蛋白的高效价、高特异性的单克隆抗体。研究通过单克隆抗体亚型的检测,证明了制备的单克隆抗体是IgG1型;通过ELISA和Western-blot检测,证明了制备出的单抗针对IpaC蛋白的。4.鸡肠上皮细胞IpaC蛋白受体分子量的初步测定本研究是在鸡源志贺菌IpaC蛋白的单克隆抗体已制备的基础上,进行肠上皮组织细胞受体蛋白的提取,又参照病毒铺覆蛋白印迹技术,初步测定鸡肠上皮细胞IpaC蛋白受体分子量大约为55 Kda。