【摘 要】
：
革兰氏阴性菌结合蛋白(Gram-negative binding protein,GNBP)是一种重要模式识别受体,在识别入侵的病原微生物并激活Toll和Imd免疫信号途径中起开关作用,但是不同的昆虫利用
论文部分内容阅读
革兰氏阴性菌结合蛋白(Gram-negative binding protein,GNBP)是一种重要模式识别受体,在识别入侵的病原微生物并激活Toll和Imd免疫信号途径中起开关作用,但是不同的昆虫利用不同模式识别蛋白对病原物的识别和激活下游效应因子,其机理不明确。为了详细了解GNBP家族在昆虫模式识别中的作用,本论文以重要蔬菜害虫小菜蛾(Plutella xylostella)为研究材料,对GNBP家族中的GNBP2基因在小菜蛾中功能进行了详细的研究,主要结果如下:利用RT-PCR和RACE技术获得小菜蛾GNBP2基因cDNA全长序列,命名为PxGNBP2,(GenBank no:MH319940)。基因序列全长为1673 bp,开放阅读框(ORF)为1473 bp,编码491个氨基酸,蛋白分子质量为52 kDa,等电点PI为6.73。生物学软件分析PxGNBP2含有一个由19个氨基酸残基组成的信号肽,不含跨膜区。系统进化树显示小菜蛾PxGNBP2氨基酸序列与菜粉蝶(Pieris rapae)、大斑蝶(Danaus plexippus plexippus)、凤蝶(Papilio xuthus)亲缘关系最近。为了进一步阐明小菜蛾PxGNBP2基因在小菜蛾体内的时空表达模式和对不同病原菌的敏感性,本研究利用qRT-PCR对其小菜蛾发育历期进行检测,小菜蛾PxGNBP2基因在各个龄期都有表达,在蛹期的表达量最高,其次是4龄幼虫;利用qRT-PCR对组织进行检测,PxGNBP2基因在中肠中的表达量最高。qRT-PCR检测PxGNBP2基因在不同的微生物侵染后表达模式,革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、苏云芽孢杆菌)和革兰氏阴性菌(大肠杆菌、粘质沙雷氏菌)都能诱导小菜蛾PxGNBP2基因上调表达,其中粘质沙雷氏菌在12 h时诱导表达最明显,达到差异显著水平,说明PxGNBP2基因对革兰氏阴性菌的敏感性最强。为了获得小菜蛾PxGNBP2蛋白及其抗血清,本论文构建了原核表达质粒pGEX4T-PxGNBP2,在表达宿主菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE检测表明,融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为52 kDa,与预测的蛋白分子量大小相一致。利用GST对融合蛋白PxGNBP2进行纯化,融合蛋白免疫新西兰大白兔,获得效价滴定很高的抗血清anti-PxGNBP2。Western blot检测显示,制备的抗血清能特异识别表达的融合蛋白。为了从mRNA水平上研究PxGNBP2基因的功能。本论文体外合成PxGNBP2基因的dsRNA,微量注射到4龄第一天小菜蛾后解剖中肠,qRT-PCR检测RNAi效果。结果显示注射12 h后,PxGNBP2基因的mRNA水平显著降低,达到差异极显著水平;我们进一步构建了表达质粒L4440-PxGNBP2,转化菌株HT115中进行表达后饲喂小菜蛾。qRT-PCR检测结果表明PxGNBP2基因在小菜蛾中肠中6h开始显著降低,一直持续到36h,18 h表达量最低,并进一步饲喂粘质沙雷氏菌(S.marcescens),12 h后取其中肠,qRT-PCR对其下游8个抗菌肽基因的表达情况进行检测,结果表明抗菌肽Defensin、Moricin、Gloverin、Cecropin1、Cecropin 2和Cecropin3能显著下调。以上研究表明,小菜蛾PxGNBP2基因能被革兰氏阳性菌和阴性菌诱导表达。将重组菌株HT115添食小菜蛾,可以沉默PxGNBP2的表达,进一步调控抗菌肽Defensin、Moricin、Gloverin、Cecropin1、Cecropin 2和Cecropin3的表达。本研究不但补充了βGRP的家族成员,而且还为研究其在免疫系统中的调控作用奠定了基础。
其他文献
据研究统计我国现有建筑存量已达650亿平方米,来自于建筑行业的碳排放量已达全国排量的40%左右,其中,来自于公共建筑的能耗又占建筑总排量的38%左右。随着时代发展,人们对建筑功能的要求越来越高。尤其对于既有公共建筑来说,无论是能耗方面还是环境方面,过去的老建筑已经难以满足人们办公、生活的需要。为促进既有公共建筑的良好发展,我国出台了一系列法规条文,鼓励各级政府积极推行落实节能减碳措施。与此同时,国
随着我国城市更新步伐不断加快,城市中出现大量闲置的老旧工业建筑占据城市的中心位置,因其历史文化价值等原因不宜对其拆除,因此旧工业建筑改造成为城市更新改造的重要组成部分。工业建筑大空间体量特点比较符合创意文化产业园的空间和功能特性要求,旧工业建筑转型创意文化产业园改造过程中的节能改造设计对降低建筑后续的使用能耗,实现绿色节能起到决定性的作用,也是旧工业建筑改造的重点内容之一,本文以合柴·1972文创
2024-T3铝合金具有机械强度高、硬度大、耐热性好及易加工的优点,在交通运输、航空航天、机械制造等领域应用广泛,但该合金材料铜含量高,容易腐蚀失效。由2024-T3铝合金材料制备的零部件需进行严格的表面防护处理才能满足相应工业技术标准。六价铬钝化是高铜铝合金有效的表面防护处理技术,裸膜具有很好的耐腐蚀性,而且对有机涂料配套性好。尽管六价铬钝化膜性能优异,但其有很大的毒性,对于人体及自然环境有巨大
随着课程改革的不断深入,地理教学的要求也越来越高,从以前的浅层学习转为现在的深度学习,地理教育也逐渐重视对学生的深度教学。高中地理过程知识在高中地理知识中具有很重要的地位,但是在进行教学的过程中教师普遍认为地理过程知识教授难度偏大,学生理解起来困难,高中地理过程知识成为了一个地理教学中的难点。为了解决高中地理过程知识教学的难点,以及为了促进高中地理过程知识的深度学习,本篇从促进高中地理过程知识深度
近年来,突发公共事件或重大伤亡事故频发,尤其是在拥挤地区,一旦发生紧急情况,很容易造成人群拥挤和踩踏。因此,为了减少危险事件的发生,需要提前对人群进行疏散演练。日常的实战疏散演练耗资巨大,且不能真实反映人们在紧急情况下的运动行为。近些年,计算机仿真技术得到了越来越多的关注,利用计算机仿真技术能够构建场所模型并模拟人群在场所内的疏散过程,进而为紧急情况下的人群疏散提供指导。因此,利用计算机仿真技术研
交通标志检测方法是无人驾驶和高级辅助驾驶的核心技术,也是近几年学术界的研究热点。行车时,交通标志检测系统进行实时检测并传回路况信息,驾驶员根据信息对当前路段交通状况做出准确的判断,防止交通事故的发生。传统的目标检测算法通过人工标注提取交通标志特征,精度及效率低下,应用在实际的道路场景中难以保证检测的实时性。采集交通标志数据时不可避免地受到光照、天气等因素的影响,或者交通标志被树木遮挡等干扰,从而影
电驱动总成已经广泛的应用于新能源汽车,其能否高效且可靠的为新能源汽车提供动力是国内外长期关注的焦点。电驱动总成在生产线末端的在线检测是保障质量的最后一道防线。因此,未来电驱动总成在线检测的发展重点是找到一种有效且高精度的故障分类识别方法。目前,在线检测常用的方法主要包括人工特征提取的专家系统和人工辅助检查。专家系统需要专业领域的专家建立完善的故障检测知识库,过度赖专家经验以及先验知识;人工辅助检测
近年来四川省加强了对在校学生的地震逃生能力的培养和教育。传统的地震逃生演练存在着实施成本高、涉及到的各类资源较多、协调组织不方便等缺点,虚拟现实技术的出现可以通过3D虚拟环境进行在线逃生演练,可以解决传统演练模式中存在的问题。绵阳职业技术学院为了加强学生的地震逃生能力和意识,组织实施了一套基于3D虚拟场景的地震逃生演练系统。在本文中对该系统的设计和实现过程进行了详细分析。本文主要进行了如下工作:(
随着我国经济发展的日新月异,改革发展成为了时代的主题,创新成为了我国新时代下重要的动力源。作为企业创新活动主要的策划者和高管团队中的创新人才,技术高管通常在制定创新战略,影响企业创新要素投入,组织技术层面创新活动等方面发挥着至关重要的作用。随着科学技术的迅猛发展,企业面临的内外部环境复杂多变,传统的组织结构和治理方式受到严重影响。如何合理配置高管团队、有效分配有限的资源以及平稳提升企业的绩效,成为
非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)作为世界五大鲜切花之一而被广泛种植,然而我国却缺乏具有自主产权且受市场欢迎的非洲菊品种。传统的辐射、诱变或杂交育种技术周期长且缺乏