【摘 要】
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淹水胁迫严重影响植物的生长发育,甚至导致植物死亡。因此,研究植物抵抗淹水胁迫的机制,对作物遗传改良具有重要意义。拟南芥转录因子ERF-Ⅶ是一种乙烯响应因子,在植物抵抗淹水胁迫的过程中发挥重要作用。本研究以野生型拟南芥Col、突变体atg10、erf72、erf74和erf75为实验材料,设置淹水(WL)不同时间(0 h、4 h、8 h、12 h和24 h)处理,以正常生长的拟南芥为对照(CK),研
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(No.31871530)
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淹水胁迫严重影响植物的生长发育,甚至导致植物死亡。因此,研究植物抵抗淹水胁迫的机制,对作物遗传改良具有重要意义。拟南芥转录因子ERF-Ⅶ是一种乙烯响应因子,在植物抵抗淹水胁迫的过程中发挥重要作用。本研究以野生型拟南芥Col、突变体atg10、erf72、erf74和erf75为实验材料,设置淹水(WL)不同时间(0 h、4 h、8 h、12 h和24 h)处理,以正常生长的拟南芥为对照(CK),研究拟南芥中缺氧响应基因HRGs、乙烯响应因子ERF-Ⅶ和自噬相关基因ATGs的表达水平变化,ERF72与ATG10p、ERF74p、ERF75p的相互作用关系,以及淹水胁迫对拟南芥生长状态和生理指标的影响,探究ERF72调控淹水胁迫响应的机制。然后通过BALSTP比对到9个小麦Ta ERF-Ⅶ,分析它们的进化关系、蛋白质保守结构域、组织表达模式和淹水胁迫下的表达模式。主要结果如下:1)淹水胁迫能显著诱导野生型拟南芥中缺氧响应基因HRGs的表达,进而响应淹水胁迫。2)淹水胁迫诱导了拟南芥ERF-Ⅶ亚家族基因的表达上调,其中ERF72上调最为显著。在淹水胁迫下,拟南芥种子发芽受到抑制,突变体erf72种子发芽率显著低于野生型;淹水胁迫还会导致根长变短,叶片发育迟缓和的叶绿素含量下降,其中突变体erf72生长受到的抑制程度加剧。3)淹水胁迫下,突变体erf72中ERF74和ERF75基因表达水平显著降低。酵母单杂交(Y1H)和GUS染色实验结果发现ERF72可结合ERF74和ERF75的启动子区域。ROS染色实验发现,突变体erf72中的活性氧含量显著高于野生型,表明ERF72可能通过调控ERF74和ERF75的转录参与ROS生成。4)淹水胁迫下自噬相关基因ATGs(ATG2、ATG7、ATG8e和ATG10)的表达水平上升;而在突变体erf72中ATG10的基因表达水平始终低于野生型。亚细胞定位表明,ERF72与ATG10均定位于细胞核。YIH和GUS染色实验结果发现ERF72参与ATG10的转录调控。表明,ERF72可能通过调控ATG10的转录参与自噬发生。(5)从小麦基因组中比对到9个与At ERF-Ⅶ的氨基酸序列相似度高的Ta ERF-Ⅶ,与At ERF-Ⅶ的进化分析显示Ta RAP1A、Ta RAP1B和Ta RAP1D与At ERF72亲缘关系最近;蛋白质保守结构域分析显示,9个基因均具有1个高度保守的AP2结构域;组织表达模式分析表明,9个基因有较强的组织特异性,在根和种子中高表达。淹水胁迫下的表达水平显示,除Ta RAP5D和Ta HRE7D表达水平变化不明显外,其余Ta ERF-Ⅶ基因的表达水平均在淹水胁迫4 h时显著升高。证明,Ta ERF-Ⅶ基因与At ERF-Ⅶ基因一样,可以响应淹水胁迫。综上所述,淹水胁迫能对拟南芥的发芽和生长造成严重影响,ERF72可能通过参与ROS的产生和自噬的发生响应淹水胁迫,而ERF72的突变导致拟南芥对淹水胁迫的抗性降低。对小麦中的9个ERF-Ⅶ亚家族基因的初步研究结果表明小麦中Ta ERF-Ⅶ基因响应淹水胁迫,为小麦遗传改良提供了理论基础。
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