不同剂量1,25(OH)2D3协同甲强龙对哮喘小鼠气道炎症的影响及机制

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目的:近来越来越多的研究发现,维生素D可以通过增强糖皮质激素抗炎效应或逆转激素抵抗作用来治疗哮喘。一旦涉及到补充维生素D,其补充剂量便是最关心的问题。目前补充维生素D的剂量以及其不同浓度产生的不同效应方面尚无统一标准,因此,本试验探寻能协同甲强龙最大限度发挥抗炎作用的维生素D补充剂量,为维生素D应用于治疗和预防哮喘,增强糖皮质激素的敏感性,降低糖皮质激素的用量提供依据。方法:将4-5周BALB/C雌性小鼠40只随机分为5组:空白对照组(A)、哮喘组(B)、甲强龙组(C)、低剂量1,25(OH)2D3联合甲强龙组(D)、高剂量1,25(OH)2D3联合甲强龙组(E),每组8只。B、C、D、E、组分别用卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)溶液腹腔注射致敏与OVA雾化吸入激发,C、D、E组激发前1h分别予以5mg/kg的标准腹腔注射甲强龙干预,低剂量1,25(OH)2D3联合甲强龙组(D)激发前1h以5ug/kg的标准腹腔注射1,25(OH)2D3(等同于我国维生素D每日推荐摄入量(RNI)400IU)干预,高剂量1,25(OH)2D3联合甲强龙组(E)激发前1h以10ug/kg的标准腹腔注射1,25(OH)2D(3等同于我国维生素D每日推荐摄入量(RNI)的两倍)干预。A组予以等剂量0.9%生理盐水腹腔注射和雾化吸入。最后1次激发后24h,测定各小鼠气道反应性后处死小鼠,行肺泡灌洗液细胞计数及肺组织苏木精一伊红(H—E)染色观察各组小鼠气道炎症情况。用免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肺组织匀浆液MKP-1(Mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1)的表达,酶联免疫吸附测定法检测各组小鼠血清IL-10、趋化因子FKN(fractalkine)的含量。结果:1:经1,25(OH)2D3干预后的D组、E组分别与哮喘组、甲强龙组比较,增强呼气间歇值(Penh)明显降低(P<0.05);小鼠血清IL-10的含量显著升高(P<0.05);趋化因子FKN(fractalkine)的含量显著降低(P<0.05);肺组织匀浆液MKP-1的表达水平明显上调(P<0.05);肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞数(Eosinophils,EOS)比例降低明显(P<0.05);肺组织切片显示支气管嗜酸性粒细胞浸润以及粘膜充血水肿、炎症较轻,组织结构形态学上未见明显肺泡结构破坏、肺泡增厚及肺泡间质纤维化。模型组肺组织炎症最重,支气管粘膜见大量嗜酸性粒细胞及中性粒细胞浸润,肺泡腔内有大量坏死渗出物,纤毛倒伏脱落,上皮细胞坏死,甲强龙组病理变化介于两者之间。D组与E组气道增强呼气间歇值(Penh)、血清IL-10、FKN(fractalkine)的含量及肺组织匀浆液MKP-1的表达水平及肺泡灌洗液细胞数之间差异均无统计学意义(P>0.05),肺组织切片炎症均较轻微,两组之间无明显差异。结论:高剂量1,25(OH)2D3与低剂量1,25(OH)2D3均能通过上调MKP-1、IL-10的表达,降低FKN的含量来协同增强甲强龙减轻哮喘小鼠气道炎症的作用,高剂量1,25(OH)2D3协同增强甲强龙的抗炎作用与低剂量1,25(OH)2D3协同增强甲强龙的抗炎作用之间无明显差异。
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