核酸纳米技术在化学发光生物传感分析中的应用

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作为生物大分子之一的脱氧核糖核酸(DNA)由于具有独特的理化性质,被广泛的用于制造各种纳米结构,目前DNA纳米技术已成为纳米科学最为活跃的研究领域。由 DNA和 RNA构成的自组装纳米结构,凭借其易于标记、结构设计灵活、稳定等特点为生物传感的设计和制作提供了一种新技术和新方法。本文利用核酸自组装技术开展了如下工作:  本文首先利用靶microRNA引发两条发卡结构的DNA的构象发生改变,在聚合酶/剪切酶的作用下,生成大量辣根过氧化物DNA模拟酶,催化鲁米诺/过氧化氢化学发光体系,实现了对microRNA-122的高灵敏和高选择性检测,提出了一种基于链置换反应由靶引发的级联循环放大免标记检测miRNAs的新方法;实现了对microRNA-122的精细检测,得到线性范围为1fM到100 pM,检测限达到0.82 fM(3σ)。分别检测四种不同碱基序列的miRNA检测miRNA-122、miRNA-let-7a、miRNA-let-7b和 miRNA-let-7c。表现出良好的选择性。第二,以microRNA作为引物,在磁珠表面通过自组装形成DNA网络结构,构建新型化学发光共振能量转移生物传感器,该结构中包含辣根过氧化物DNA模拟酶和荧光素基团,从而实现化学发光共振能量转移对microRNA的高灵敏度检测;检测限为10fM,分别检测不同序列的miRNA(空白,miR-let-7a,miR-let-7b, miR-let-7c,miR-122),表现出良好的选择性。第三,基于链置换反应,由靶引发两条DNA发卡结构和一条环状DNA结构自组装形成双螺旋DNA发卡结构,靶miRNA会释放出来,同时引发新一轮的自组装过程,从而实现引发链的等温循环放大检测,进而通过实时荧光检测,实现对miRNA的高灵敏度检测。
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