论文部分内容阅读
目的：探讨低浓度硝酸银对体外培养角朊细胞增殖的影响。方法：建立HaCaT(人KC细胞株)角朊细胞的体外培养模型,分别于接种细胞贴壁后,随机分为(1)对照组,不添加药物试剂；(2) AgN03一组,培养基中添加终浓度为1×10-5mol/l AgNO3;(3) AgNO3二组,培养基中添加终浓度为1×10-6mol/l AgNO3;(4) CFTRinh-172抑制剂组,培养液中添加终浓度为10umol/ml CFTRinh-172溶液。每24h更换相应药物浓度的培养液。并在细胞贴壁后即刻、24h、36h、48h、72h、84h、96h进行每组0D测量。24h及48h进行MQAE染色,利用酶联免疫检测仪检测细胞内氯离子荧光含量,DAPI染色后,免疫荧光显微镜检测。结果：HaCaT细胞接种2小时后,细胞沉降至培养板内底部,各实验组间的基础0D均值(P>0.05),随后添加硝酸银组较其他组0D值高(P<0.05),生长曲线提示,添加硝酸银实验组HaCaT细胞呈指数生长,约在72H后达生长平台期,较其他两组有明显促进作用,添加终浓度为10umol/1的CFTRinh-172溶液实验组细胞生长较其他三组慢。添加不同浓度的AgNO3对细胞生长有明显的促进作用,添加终浓度为10μmol/m1的CFTRinh-172溶液实验组细胞生长较其他三组慢(P<0.05)。添加硝酸银组中荧光强度明显强于对照组及抑制剂组,说明细胞内部Cl-含量明显下降,48h后各组细胞内荧光强度进一步增强,提示细胞内氯离子外流增加。在无钙改良RPMI1640培养液中添加不同浓度的AgNO3离体培养HaCaT细胞,其HaCaT细胞外流氯离子浓度明显高于CFTRinh-172抑制剂组(P<0.05)和对照组(P<0.05)；本实验中两种浓度的AgNO3实验组没有显著性差异(P>0.05)；CFTRinh-172抑制剂组HaCaT细胞内氯离子浓度明显高于对照组(P<0.05)。HaCaT细胞经MQAE孵育染色及DAPI染色下,细胞浆呈淡绿色荧光反应,围绕细胞核,分布均匀；细胞核呈蓝色荧光,高亮。AgNO3溶液实验组较对照组细胞胞浆绿色荧光分布增多,CFTRinh-172抑制剂组较对照组细胞胞浆绿色荧光较少。结论：低浓度硝酸银对离体培养HaCaT细胞增殖有促进作用,HaCaT细胞内含有相关氯离子通道蛋白,硝酸银影响HaCaT细胞的氯离子通道促进细胞增殖作用。