昌黎与济源产区高产β-葡萄糖苷酶野生非酿酒酵母的筛选及鉴定

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β-葡萄糖苷酶在葡萄酒增香领域的重要作用已经被许多研究所证明。但目前葡萄酒生产中外加的酶源制剂大多靠进口,导致生产成本很高。葡萄酒酿造各个环节的生产过程中如葡萄园树体、土壤、葡萄容器、酿造相关设备等环境中均有各种各样的酵母菌,这些不同种类的酵母菌具有不同的形态及生理生化特点,其中可能存在着高产β-葡萄糖苷酶的菌株。本研究从河南济源与河北昌黎的葡萄酒酿造各环节中筛选能高产β-葡萄糖苷酶的非酿酒酵母,同时确定筛选高产酶菌株的方法为高效筛选高产酶菌株提供依据。1.以河北昌黎与河南济源筛选的189株野生酵母为研究对象,进行高产糖苷酶非酿酒酵母的筛选及鉴定。利用七叶苷显色技术初选β-葡萄糖苷酶高产菌株,然后以p-NPG为反应底物,利用紫外分光光度计对粗酶液进行定量分析,在最大吸收波长400nm处检测光谱吸收值,计算各菌株的粗酶液比活力,筛选出高产菌株。复选用p-NPG法测定初选菌株的粗提酶液的酶活。结果表明:河北昌黎与河南济源采集的共189株野生菌株中初选出8株优良产糖苷酶,菌株经复选其中“济13”菌株是最佳高产糖苷酶菌株,“济45”和“昌29”次之,产酶量有显著性差异(p<0.05),分别为42.51×10-3U/ml,36.14×10-3U/ml,35.9×10-3U/ml。因此确定河南济源13号菌株为最优高产β-葡萄糖苷酶酵母菌株。2.昌29、济45和济13经形态鉴定、生理生化和分子实验, PCR扩增产物DNA序列同BLAST比对,昌29与红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)26SrDNA的保守序列的相似性达到99%,济45与葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)26SrDNA的保守序列的相似性达到99%,济13与膜璞毕赤酵母(Pichia membranifaciens)26SrDNA的保守序列的相似性达到100%。最终判断昌29为红酵母(Rhodotorula mucilaginosa),济45为葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae),济13为膜璞毕赤酵母(Pichiamembranifaciens)。
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