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苏丹红I(SudanI)即1-苯基偶氮-2-萘酚,是一种人工合成的脂溶性化工染料,并被证明是一种潜在的致癌物质,禁止作为食品染料添加在食品中。2003年5月,法国从印度进口的红辣椒粉中检出苏丹红I,对此发出紧急通知。在中国,2005年2月至5月苏丹红I不断在各种食品中检出,比如:鸡腿、汉堡、辣泡菜和辣椒酱等,引起人们消费恐慌。随着科学技术的发展和国家的重视,其检测方法也不断发展。目前已有电化学分析法、光谱法、色谱法、液相色谱-质谱联用技术、免疫分析技术等检测方法。酶联免疫吸附分析法(ELISA)是一种简单、准确、快速的分析方法,具备灵敏度高、特异性强等特点,己广泛应用于临床医学检验、生物分析、食品分析和环境分析等领域中。为了建立快速、灵敏的苏丹红I残留免疫学分析方法,本研究在分析苏丹红I免疫学特性的基础上,采用单克隆抗体技术制备了苏丹红I单克隆抗体,并组装了间接竞争ELISA试剂盒。主要研究结果如下:1.苏丹红I人工抗原的制备与鉴定重氮化法合成苏丹红I的结构类似物(CSDI),以活性酯法将CSDI与载体蛋白偶联,制备BSA-CSDI免疫抗原与OVA-CSDI。并用紫外扫描(UV)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定。用SudanI人工免疫抗原(BSA-SudanI)免疫BALB/c小鼠。间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其抑制价。动物免疫试验结果显示:3只小鼠血清效价均达到了1×1.28-4,且3号小鼠多抗血清抗SudanI的IC50为67ng/mL,表明成功获得了高效价、特异性好、亲和力较高的鼠源抗SudanI多抗血清,为SudanI残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。2.苏丹红I单克隆抗体的制备及免疫学特性的鉴定间接ELISA和间接竞争ELISA检测法选择细胞融合备用鼠;运用杂交瘤技术制备苏丹红I单克隆抗体(SudanImAb),并对单克隆抗体的效价、亲和力、敏感性、特异性和亚型进行鉴定;体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体。筛选出了6H6B1、6H6E6、6H6G10、6F12E2、6F12E5和6F12G2六株敏感特异的杂交瘤细胞;鉴定单抗亚型均为IgG1;细胞培养上清间接ELISA效价在1:6.4×102～1:1.28×103之间,6H6E6细胞株制作的腹水效价为1:6.6×105,苏丹红ImAb亲和常数(Ka)为1.85×1010L/moL和1.94×1010L/moL,对苏丹红I的IC50为2ng/mL;与其它标准品无交叉反应。通过试验获得了高效价、敏感、特异的苏丹红ImAb,可用于动物性食品中苏丹红I的残留检测的免疫学试验。3.苏丹红I残留免疫学快速检测方法的建立根据酶联免疫吸附试验原理,应用苏丹红ImAb研制出苏丹红I残留快速检测间接竞争ELISA试剂盒(SudanI-Kit),SudanI-Kit的标准曲线呈S型,符合4参数logit曲线拟合,最低检测限为0.2ng/mL,半数抑制浓度IC50为2ng/mL,平均批内和批间变异系数小于<15%。对两个样品生番茄样品和辣椒面样品分别添加1、20、60、100ng/mL苏丹红I标准品,平均回收率分别为90.005%和88.475%。SudanI-Kit性能稳定,在4℃可保存6个月。