脊髓损伤后神经功能的保护和恢复仍然是世界性的一大难题。脊髓局部损伤后会出现一系列的病理变化，最终导致脊髓细胞和组织的坏死。原发性损伤周围的神经元细胞、胶质细胞、以及毛细血管暴露于明显变化的微环境中，其中一些细胞由于不能耐受这种变化而死亡，这是所谓的继发性损伤。那些经受住微环境变化的神经元细胞和胶质细胞便得以存活。为了改善脊髓损伤后的结果，大量各种各样的试验主要都是针对脊髓的继发性损伤所进行的。继希望于尽量保持原发性损伤灶周围细胞的存活。 神经细胞在遭受应激性刺激后会迅速产生所谓的应激蛋白或热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)。从其他的的实验研究中我们已经知道其中一些HSPs，如热休克蛋白70(HSP70)能够通过各种机制，对神经细胞发挥保护作用。一个亚致死性的预刺激如热休克、暂时性缺血能够诱导神经细胞产生HSP70，帮助细胞更好地抵抗随后严重的损伤性刺激。但由于预刺激不能控制HSPs表达区域、表达强度和表达类型，临床大部分脊髓损伤都为突发性，这种方法无法应用于临床。基因技术已经能够使有机体在特定的组织和细胞中大量表达HSP70，包括中枢神经系统、神经细胞，但目前还仅限于体外培养的细胞和小部分动物体内，虽说应用前景美好，但需耐心等待。 目前，如果能够通过药物诱导HSP70在脊髓内大量地表达，对临床预防和治疗脊髓损伤则具有重要的现实意义。临床上一些严重脊髓压迫的病人，由于脊髓缺血一再灌注损伤，在手术解除脊髓压迫后，病人可能发生瘫痪；脊柱畸形矫正手术很可能导致脊髓牵拉伤。这些情况如果能够通过手术前使用药物诱导脊髓神经细胞大量表达HSP70，则对术中、术后脊髓神经功能的维护具有积极的意义。甲基强地松龙(Methylprednisolone，MP)是美国FDA批准的唯一一个用于治疗急性脊髓损伤的药物。其标准治疗方案已经在世界各地广泛应用。研究表明MP通过多方面机理发挥其对脊髓的保护作用，但是否存在这样一个机理——MP通过诱导HSP70表达而在某种程度上发挥它对脊髓的保护作用?目前尚未见相关报道。 本课题是脊髓损伤的预防和治疗基础研究的一部分。通过检测HSP70在正常和损伤脊髓内的表达情况，以及预防性使用MP和治疗性使用MP对其表达的影响，尝试探索MP是否通过影响HSP70在脊髓神经细胞内的表达而在某种程度上发挥 第二军医大学硕士毕业论文对损伤脊髓的保护作用。 实验目的:研究脊髓损伤(spinal cord inju叮sel)后大鼠脊髓内HsP7o的表达，以及大剂量入仰对脊髓损伤后脊髓内HSP70表达的影响。 实验方法:采用川len法建立脊髓损伤动物模型。第一部分:选用SD大鼠65只，随机分为三组:单纯手术组(OP组，n二5);脊髓损伤组(SCI组，n=5);另外设立一组空白对照组(C组，二5)，并在脊髓损伤后6个时间点:2小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时(空白对照组任选一个时间点)，取出脊髓标本进行脊髓病理形态学观察、HSP7O的免疫组织化学染色观察，并采用图像分析系统进行定量分析。第二部分:选用SD大鼠90只，随机分为三组:预防使用MP脊髓损伤组(PT组，n=5);治疗使用Mp脊髓损伤组(TR组，n=5);为了排除药物其它作用对结果可能造成的影响，我们还设立了单纯用药组(CO组，n=5);也在脊髓损伤后6个时间段:2小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时，进行脊髓病理形态学和HSP7O的免疫组织化学染色等观察，并结合图像分析系统对HSP70免疫染色阳性神经细胞进行定量分析。 实验结果:1、大鼠SCI后，损伤段脊髓有明显出血、水肿、变性、空泡、坏死等病理变化，打击两端的继发性损伤严重;2.单纯手术组脊髓内HSP7o的表达呈弱阳性，单纯损伤组脊髓神经细胞内HSP70表达明显增加，两者的表达都在损伤后12至24小时之间达到高峰。3.预防或治疗性使用MP后，脊髓的继发性损伤减轻;在所有观察的时间点HSP70的表达明显增强，均显示为强阳性，表达高峰有所提前;尤其是预防性使用MP后，HSP70的表达在损伤后2小时便已达到很高的程度。 结论:1.多种刺激都能诱导脊髓神经细胞表达HSP7O。2.不同的刺激类型、不同的刺激强度诱导脊髓神经细胞HSP7O表达的程度也不一样。使用大剂量MP可以明显增强脊髓神经细胞HSP7O的表达，改善大鼠损伤脊髓的病理变化，提高大鼠的神经功能恢复。3 .MP能够通过诱导损伤后脊髓神经细胞大量表达HSP70而发挥对脊髓的保护作用。