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该文对核黄素半合成中间体的高效液相色谱分析方法作了系统深入的研究,首次建立了D-葡萄糖发酵液、核糖胺、偶合物和环合物中间体的检测方法,并获得了良好的结果.主要工作有:1、建立了D-葡萄糖发酵液的HPLC分析方法首次采用UV/ELSD检测器,氨基柱,乙睛-水为流动相分析发酵液中D-核糖含量.其中采用ELSD检测器时,核糖质量-体积浓度在1.5×10-2~2.0×10-3g/mL范围内,回归方程:Y=429223+975977x,相关系数R=0.9999;采用UV检测器核糖质量-体积浓度在8×10-3~1×10-5g/mL,回归方程Y=405.72835+1570.5792X,相关系数r=0.9995,具有良好的线性关系,回收率在98.1-100.8﹪之间,RSD在1.3﹪~1.7﹪之间,采用外标法测定,最低定量限可达1ug/ml.2、建立了核糖胺的HPLC分析方法采用C18柱、甲醇-水为流动相、UV检测器,首次分离出三个杂质,分离效果良好,并通过LC-MS方法,首次确定样品三个杂质的成分.该法对N-(D)-脱氧核糖醇基-3,4-二甲苯胺(核糖胺)样品定量分析结果为:回归方程Y=-135.78687+41818.6953X,相关系数r=0.9996,回收率在99.0﹪~100.1﹪之间,RSD在1.1﹪~1.9﹪之间,核糖胺与3,4-二甲基苯胺的最小检出限分别为1ug/ml与0.5ug/ml,后者可检测出的最低残存量可达0.6‰.3、建立了偶合物的HPLC分析方法采用C18柱、甲醇-水为流动相、UV检测器分析偶合物,并通过LC-MS方法,首次确定了三个杂质的成分.该法对4,5-二甲基-N-(D)-脱氧核糖醇基-2-偶氮苯基苯胺(偶合物)样品定量分析结果为:回归方程Y=-169.21+36640.9X,相关系数r=0.9997,回收率在98.7~102.0﹪之间,RSD为0.5﹪~1.9﹪之间,偶合物、核糖胺、苯胺三者的定量限分别为2 ug/ml、1 ug/ml、0.7ug/ml,可检测出的核糖胺与苯胺最低残存量分别为1.3‰、0.9‰.4、建立了环合物的HPLC分析方法采用C18柱、甲醇-水为流动相、UV检测器,成功地从样品中分离出了五个杂质,分离效果良好,并通过HPLC-MS方法,首次确定所有杂质的成分.该法对环合物样品进行了定量分析,回归方程Y=-46.7596+32377.7X,相关系数r=0.9999,回收率98.8~100.2﹪,RSD0.5﹪~1.9﹪,环合物、偶合物、巴比妥酸三者的定量限分别为0.5 ug/ml、1 ug/ml、0.6ug/ml,可检测出的偶合物与巴比妥酸最低残存量分别为2.5‰、1.5‰.5、该文测定所涉及的仪器均具有通用性好,操作方法简单,所涉及的试剂来源有保证,分析时间最长为20分钟.此外,该文建立的核糖胺、偶合物和环合物的三个高效液相色谱分析方法,除流动相配比和测定波长稍做调整外,其它条件均相同,应用十分方便.6、初步研究了核黄素HPLC内标测定方法该文以核黄素磷酸钠作为内标物,初步研究了核黄素的HPLC内标法测定,内标物的优点是:保留时间间隔适当,响应值接近,在样品中无干扰成分,纯品来源有保证.通过与紫外分光光度法的比较,其重现性明显好于后者.