近年的研究中，天然免疫现象成了一个倍受瞩目的课题，作为机体天然免疫的重要组成部分，天然自身抗体(NAA)也受到了广泛的关注。NAA广泛存在于人和脊椎动物体内，具有多反应性、低亲和力、缔和性广及种属特异性差的特点。抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)是NAA的重要组成部分，在对AK auto Ab免疫学特性及生理和病理意义的大量研究中，直接或间接地发现AK auto Ab是机体正常免疫调节网络的组成部分，在维护生理状态的稳定、清理衰老细胞及代谢产物、调节免疫和抗感染等方面起到重要作用；在一些病理情况下(如银屑病、接触性皮炎等)，体内AK auto Ab的组分和滴度会发生变化，而正常水平的AK auto Ab则有利于限制病情的发展，促进损伤的修复。CD5~+B细胞作为一种特殊类型的B淋巴细胞，可产生多种自身抗体，主要是多反应性、低亲和力的IgM型抗体，还可能参与胸腺细胞克隆选择，对免疫系统的成熟和自我稳定起重要的作用，在独特型网络、抗原提呈及诱导免疫耐受中也起作用。补体Ⅱ型受体CD21／CR2分子主要分布于B淋巴细胞膜上，其天然配体为C3裂解片段，同时它也是EB病毒表面包膜糖蛋白gp350／gp220、HIV-1、IL-6、TNF-α、CD23／FcεRⅡ等的结合位点，CD21／CR2与不同的配体结合，广泛参与了免疫应答、组织修复及炎症反应等过程。 现已证实补体的活化以及B细胞表面CR2的交联在先天和获得性免疫之间架起了重要的桥梁，表现为C3与B细胞CD21的第四军医大学博士学位论文相互作用有利于启动抗体应答反应，并对初级抗体应答反应有调节作用，CDZI/C D35对于抗体的亲和性成熟具有重要作用，在抗原浓度低的情况下，对于活化B细胞是至关重要的，而且mlgM一CDZI交联有利于特异的低亲和性B细胞对T细胞依赖性抗原和T细胞非依赖性抗原产生免疫应答。在补体研究的某些方面也涉及天然自身抗体的相关内容，补体系统对产生NAA的CDS十B细胞有阳性选择作用，CRI/CR2缺陷的CrZ一八小鼠腹膜CDS+B细胞群减少。 gp350是EB病毒相应膜抗原的一个蛋白质成分，具有ADCC的抗原决定簇，抗gp35o抗体是中和抗体，有免疫保护作用，gp35o具有介导EB病毒吸附宿主细胞表面受体CRZ的位点，是CRZ的特殊配体。有关gP350与人B细胞的补体C3d受体CDZI结合的工作已有大量报道:EBV gp35o通过与CDZI结合可诱导B细胞增殖以及IL一6的产生;以gP35O作为CRZ的配体，通过共交联mlg和CRZ观察对B细胞的刺激，发现低浓度的抗人膜表面免疫球蛋白IgD共交联gp350(anti一IgD一gp350)能刺激B细胞高度增殖，这依赖于19结构和CRZ，因为CRZ抗体有效地阻止了这种增殖，这说明将gp350连接到那些具有弱免疫原性的分子能使细胞系扩展，并且激活那些同时结合了抗原和CRZ配体gp35o的抗原特殊的B细胞，因此，交联gp350携带分子是提高人类对弱免疫原性分子免疫应答的一个理想方法。而且这种方法无需外源性辅助因子的参与就能使B细胞系扩展和激活。早先曾有人使用抗体交联到C3d与CRZ共辘抗原的方法提高抗体应答，即抗原结合到补体C3，如果同时交联了mlg和CD21，在低浓度抗原时就能诱导B细胞激活，在缺少mlg情况下，以抗CDZI抗体交联B细胞CRZ同样能诱导B细胞的增殖和分化，如果用gp35o替代C3d有很多优点，它解决了由于注射包括补体在内的任何自身抗原可能产生的自身抗体带来的影响，产生针对gp350的抗体是有利的，可以提供对 4第四军医大学博士学位论文EB病毒媒介的疾病的保护作用。 我们既往的实验证实了EBV蛋白能诱导培养的B细胞产生可能具有NAA性质的免疫球蛋白，并推测很可能是EBVgP350活化CDZI的结果。为了进一步验证纯化的gp35o肤段是否具有诱导抗体产生的作用，我们对EBVgp35O肤段进行了克隆和纯化，得到去除了EB病毒的野生型，保留了与CD21结合的gp350肤段。国外的研究己经证实EBV gp350通过与CD21结合可诱导B细胞增殖以及工L一6的产生是通过NF一KB途径实现的。NF一KB是一种重要的核转录因子，参与众多基因的调控，其中包括病毒瘤基因、免疫调节分子、白细胞粘附分子、急性期反应蛋白、细胞因子、生长因子、转录和生长调控因子等;能够激活NF一KB的诱导因素又分几大类:细菌产物如脂多糖(LPS)，病毒或病毒产物如人类免疫缺陷病毒(HIV)，凋亡因子，HZOZ以及丫射线等。 因而，进一步研究纯化的gp350肚段是否刺激CDS+B细胞产生具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白及其可能的作用机理，一方面可以验证gp35o肤段的活性，另一方面也可以从免疫系统自我调节的整体观出发，探讨天然自身抗体的产生机理。 本实验首先检验了纯化的gp35o月太段能否刺激培养的CDS+B细胞产生免疫球蛋白和相关的细胞因子以及刺激前后CDS十B细胞表面标志CDZI的改变情况。在无菌条件下采集新生儿脐带血，采用RosettesePTM方法分离出总B细胞，免疫磁珠分离得到CDS+B细胞，将分离所得的总B、CDS+B、CDS卫三组细胞分别用EB病毒、紫外线照射灭活的EB病毒(UV-EBV)、gP35O刺激，于培养的第18小时起，不同时间点分别留取上清，EL