背景及目的:胃癌作为消化系统常见肿瘤之一,在全世界范围内,胃癌的发病率居所有恶性肿瘤第四位,死亡率居第二位。尽管在诊断与治疗方面已经有了很大的提高,但其复发率与死亡率并没有明显的降低,居高不下的复发率和死亡率已经使胃癌的研究与治疗成为医学上探究的热点。BCL6B为胃癌发生发展过程中的一个重要抑癌基因,已有人证实其启动子区GC岛的高甲基化导致其抑制肿瘤功能的表观失活,然而是什么样的机制对BCL6B基因进行表观调控的研究还未被报道。本实验首次研究DNA羟化酶TET1对胃癌抑癌基因BCL6B的表观调控机制,拟阐明BCL6B于胃癌发生发展进程中甲基化程度改变的主要原因,揭示TET1调控胃癌肿瘤发生发展以及耐药能力的功能作用以及相关下游分子调节机制。该项目成功实施将揭示胃癌发生发展的一个新机制,为胃癌的诊断以及临床治疗在表观遗传水平上提供可能的新靶点。方法:本实验选用了SGC7901与其顺铂耐药株SGC7901/DDP做为对比,Western blot以及q PCR检测TET1和BCL6B的蛋白/m RNA表达情况,并采用亚硫酸氢盐PCR(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)检测两株细胞中BCL6B基因启动子区域甲基化的情况;进一步,在SGC7901细胞株中通过过表达以及敲减TET1并检测其是否影响BCL6B的表达变化;在SGC7901与SGC7901/DDP中分别加入DDP后检测其对BCL6B表达的诱导情况;利用稳转技术构建BCL6B敲减的SGC7901胃癌细胞株,以及BCL6B过表达的SGC7901/c DDP胃癌细胞株,并利用MTT法检测各组细胞对顺铂化疗的耐受能力;于裸鼠体内将对照组及BCL6B基因敲除的SGC7901胃癌细胞系进行裸鼠皮下注射,对形成的肿瘤测量体积、质量,分析各个部位转移情况。结果:与SGC7901/DDP相比,SGC7901里BCL6B的启动区具有较低程度的甲基化。其蛋白和m RNA表达水平也有显著的降低。在SGC7901细胞株中通过稳转过表达以及敲减TET1并检测BCL6B的表达,发现随着TET1的过表达,BCL6B也出现过表达的表现,当TET1敲减时,BCL6B也呈现相应的表达降低。SGC7901的BCL6B敲减株中,顺铂加药后测生长曲线显示SGC7901的BCL6B敲减株较对照组存活率高;SGC7901—DDP的BCL6B过表达株中,顺铂加药后测生长曲线显示SGC7901/DDP的BCL6B过表达株较对照组存活率低。对SGC7901与SGC7901/DDP分别做耐药实验显示,加药后它们的BCLB水平均下调,并随着药物浓度的不同而改变。裸鼠体内将对小鼠用SGC7901/BCL6B-K.O.组与对照组细胞SGC7901皮下注射成瘤后观察,发现SGC7901成瘤率及成瘤速度,瘤体大小均较BCL6B敲除组低、慢、小。结论:本实验结果显示BCL6B基因在胃癌细胞株里高甲基化,TET1是表观调控胃癌抑癌基因BCL6B启动子区的甲基化的重要基因;BCL6B基因在胃癌细胞里高甲基化与胃癌的耐药性息息相关,提示BCL6B的甲基化可能成为评估胃癌预后及作为胃癌标志物的一项指标,通过促进TET1的表达去除BCL6B的甲基化,恢复和升高BCL6B的表达来抑制肿瘤的生长发展可能作为未来胃癌治疗的方向。但是BCL6B在胃癌的浸润转移方面的作用以及TET1的调控机制仍然需要我们的进一步深入研究。