禽流感(avian influenza,AI)是由A型禽流感病毒(avian influenza A virus,AIV)引起的禽类烈性传染病。1997年,以往仅能感染致死禽类的H5N1亚型高致病性禽流感病毒在香港特区引起人感染,导致18人入院治疗,6人死亡,死亡率达33.3%,这是全球首次发现禽流感病毒能直接感染人,引起了科学界的轰动。自2003年以来至今短短的几年间,报道禽流感病毒感染384例,死亡241例,死亡率惊人,高达62.8%。可见禽流感病毒给人类带来了严峻的挑战,具有极其重要的公共卫生学意义。禽流感病毒的核酸是负链单股RNA,其基因组共由8个独立的RNA片段组成。其中PB1在聚合酶的催化中起中央调控作用。它包含RNA依赖RNA的蛋白基序,直接参与RNA链的延伸。PB1B是禽流感病毒聚合酶蛋白PB2亚基与PB1亚基的结合位点,由于缺乏结构相关的数据,聚合酶蛋白催化功能的具体机制尚有待研究,我们将采用晶体学方法探明流感病毒RNA聚合酶的结构、相互作用位点和作用方式。本实验将PB1B基因进行体外扩增,在Escherichia coli中得到了高效的表达,经Ni-NTA亲和层析、Resource Q离子交换层析和Superdex-75凝胶层析分离等技术进行了目标蛋白的分离纯化。采用悬滴气相扩散法对蛋白进行结晶。筛选和优化结晶条件,获得适合X-射线衍射的不同空间群的晶体,并分别收集高质量的X衍射数据。实验结果表明,成功构建了重组质粒pET-28a-PB1B,并对其进行诱导表达,获得可溶性蛋白。通过优化纯化条件,获得了高纯度的目标蛋白。所得的纯化蛋白的分子量约为47kDa。在结晶溶液中,纯化的目标蛋白PB1B具有良好的均一性,适合蛋白结晶。经X线照射,获得了两种不同结晶条件下的适合X-射线衍射的两种不同空间群的晶体。