【摘 要】
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目的:以乙型肝炎病毒(HBV)P基因为靶点,构建表达小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,体外观察针对P基因的siRNA在HepG2.2.15对HBV转录和翻译的影响。方法:将构建的五个psiRNA-H1
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目的:以乙型肝炎病毒(HBV)P基因为靶点,构建表达小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,体外观察针对P基因的siRNA在HepG2.2.15对HBV转录和翻译的影响。方法:将构建的五个psiRNA-H1真核表达质粒psiRNA0, psiRNA1, psiRNA2 psiRNA3,psiRNA4瞬时转染HepG2.2.15细胞,用半定量RT-PCR对HBV RNA(HBsAg-mRNA,HBeAg-mRNA和HBxAg-mRNA)进行检测,ELISA对细胞上清的HBsAg, HBeAg进行检测,用Western Blot检测X蛋白的表达。结果:酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了针对P基因不同位点的真核表达载体分别命名为psiRNA0, psiRNA1, psiRNA2 psiRNA3,psiRNA4。通过不同的检测方法,结果证明针对P基因的siRNA能下调HBVS基因,C基因和X基因表达,其中psiRNA1, psiRNA2对S基因的抑制明显强于psiRNA3,psiRNA4。psiRNA3,psiRNA4对C基因的抑制明显强于psiRNA1, psiRNA2,在所构建的psiRNA中psiRNA4对HBV X表达的抑制明显高于其他组。结论:siRNA被认为是一种有效的抑制HBV转录和复制的手段。针对P基因的siRNA对HBV转录和翻译的抑制效率主要是由靶位点在基因中的位置决定。在P基因上寻找高效抑制HBV复制和转录是可行的有必要的。
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