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禽流感病毒(Avian influenza virus,AlV)广泛分布于世界范围内的家禽(鸡、鹌鹑、家鹅、家鸭等)、野禽(野鸭、野鹅、天鹅等)等禽类。根据AIV对人工感染鸡的致病性不同,可将其分为高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza Virus,HPAIV)和低致病性禽流感(Low pathogenic avian influenza Virus,LPAIV),并且跨种传播成为近来年AIV的主要流行趋势。视黄酸诱导基因蛋白1(Retinoic acid-inducible genel,RIG-I)是先天性免疫系统的重要组成部分,许多研究表明RIG-I在人和哺乳动物的抗流感过程中起着重要作用,然而有关禽类RIG-I的研究数据有限。一些研究发现鸭科动物有RIG-I基因而鸡缺失,推测这可能是鸡和鸭感染AIV后表现差异明显的主要原因之一。鸭为什么对AIV有相对较强的抵抗力?针对这个问题,本研究首先扩增了野生绿头鸭RIG-I基因的全长,并分析其在各组织中的表达与分布;然后以SPF鸭(绍兴麻鸭)为模式动物,人工接种不同毒力AIV,探究脾脏RIG-I通路中各先天性免疫因子随时间变化的规律,以及RIG-I通路在鸭科动物抗AIV中的作用及其分子机制,以期为人类防控AIV提供理论和现实指导依据。1、经禽流感病毒、新城疫病毒、大肠杆菌、沙门氏菌等病原的初步筛查,选取健康状况较好的野生绿头鸭样本采集心、肝、脾、肺、肾、十二指肠,经普通RT-PCR扩增野鸭RIG-I基因(MdRIG-I),并进行生物信息学分析;再运用荧光定量RT-PCR检测其在各组织脏器中的相对表达水平。结果显示:MdRIG-I基因的CDS序列,全长2802bp,编码933个氨基酸,具有较强的种间特异性,蛋白质结构典型,各部位之间mRNA的表达量各不相同,在肝脏中表达水平最高,其次是十二指肠,在心和脾中表达,在肺和肾低表达。2、90只4周龄的SPF鸭(绍兴麻鸭)分为3组,以滴鼻、口咽的方式分别接种PBS、LPAIV H4N6 和 HPAIV H5N8,在接种后的 6h、1d、2d、3d、5d、7d、10d、14d,每组随机选取3只鸭子安乐死后采集脾脏,并提取其总RNA,采用荧光定量RT-PCR检测RIG-I通路中的关键先天性免疫因子RIG-I、IPS-1、IKK-β、NF-κB、TBK-1、IFN-β、IL-8的相对表达量。结果显示:H4N6在SPF鸭(绍兴麻鸭)的脾脏中会诱发先天性免疫因子的多个表达高峰,第一次是在6h-2d,第二次是在5d-10d,在10d-14d会表现出一个上升的趋势,是下一个高峰的前兆;H5N8在SPF鸭(绍兴麻鸭)的脾脏中会诱导比较明显两个表达高峰,第一个表达高峰通常在6h-2d/3d,在5d/7d-14d会诱导一个不断上升的高表达。二者皆在2d/3d-5d/7d出现一个表达的低谷。先天性免疫因子 RIG-I、IPS-1、IKK-β、NF-κB、TBK-1、IFN-β、IL-8 均参与了 RIG-I 通路介导的抗流感反应,且相互之间高度相关。并且,SPF鸭(绍兴麻鸭)感染AIV后的10d-14d,HPAIV H5N8相较于LPAIV H4N6能诱导更高水平的先天性免疫反应。总之,本研究成功克隆了绿头鸭RIG-I基因,并且SPF鸭(绍兴麻鸭)无论是感染LPAIV H4N6还是HPAIV H5N8,都能通过RIG-I信号通路诱发机体的先天免疫反应而发挥抗AIV的重要作用,为禽类先天性免疫的研究以及人类防控AIV提供了理论和现实指导依据。